ИСТИНА

В результате сравнительного изучения возможности использования силикагелей, микрокристаллической целлюлозы и пенополиуретанов в качестве носителей для иммобилизации пероксидазы из корней хрена и щелочной фосфатазы из кишечника цыпленка установлено, что пенополиуретан 5 30 на основе простых эфиров является наиболее перспективным (из изученных) носителем для иммобилизации данных ферментов. Показано, что активность и стабильность иммобилизованных пероксидазы и щелочной фосфатазы определяются главным образом природой и структурой носителя, а не свойствами самих биокатализаторов.Установлено, что независимо от природы субстрата скорость накопления продуктов пероксидазного окисления арилдиаминов или гидролиза п-нитрофенилфосфата в присутствии щелочной фосфатазы понижается в рядах раствор > хроматографическая бумага > пенополиуретан и раствор > пенополиуретан, соответственно.При сравнительном спектроскопическом изучении реакций окисления о-фенилендиамина, о-дианизидина и 3,3’,5,5’-тетраметилбензидина, катализируемых нативной пероксидазой и иммобилизованной на хроматографической бумаге и пенополиуретане, выяснено, что указанные носители оказывают влияние на химизм индикаторных процессов, обусловленное вмешательством концевых п-толуидиновых групп пенополиуретана и модифицированной ими хроматографической бумаги. Показано, что при иммобилизации на пенополиуретане предварительная модификация пероксидазы и щелочной фосфатазы включением их в гели полисахаридов позволяет повысить каталитическую активность и стабильность иммобилизованных препаратов. Установлено, что хитозан (с молекулярной массой 120 кДа) и N-фталилхитозан являются наиболее перспективными из изученных полисахаридов модификаторами иммобилизованных на пенополиуретане пероксидазы и щелочной фосфатазы, соответственно. Авторадиографическим методом показано, что присутствие модификаторов изменяет механизм распределения пероксидазы и щелочной фосфатазы на пенополиуретане: в отсутствие модификаторов ферменты заполняют поры носителя; в присутствии модификаторов комплекс {фермент-полисахарид}, взаимодействуя с мембранными перегородками пенополиуретана, растворяется в них. Установлено, что присутствие хитозана и N-фталилхитозана влияет на кинетические параметры (Km и Vmax) индикаторных реакций окисления о-дианизидина и гидролиза п-нитрофенилфосфата, катализируемых иммобилизованными на пенополиуретане пероксидазой и щелочной фосфатазой, соответственно.Разработаны ферментативные тест-методики определения: - ртути(II) по реакции окисления 3,3’,5,5’-тетраметилбензидина в присутствии тиомочевины с использованием пероксидазы, иммобилизованной на силикагеле и микрокристаллической целлюлозе, а также по реакции окисления о-дианизидина в присутствии тиомочевины с использованием пероксидазы, иммобилизованной на пенополиуретане (Сн = 10, 5 и 1 пг/мл, соответственно); - метил-, этил- и фенилртути по реакции окисления о-дианизидина в присутствии фенилтиомочевины и реакции окисления 3,3’,5,5’-тетраметилбензидина в присутствии диэтилдитиокарбамината с использованием пероксидазы, иммобилизованной на пенополиуретане ; - кадмия(II) и свинца(II) по реакции окисления о-дианизидина с использованием пероксидазы, иммобилизованной на пенополиуретане,- свинца(II) по его ингибирующему действию в реакции гидролиза п-нитрофенилфосфата на каталитическую активность щелочной фосфатазы, иммобилизованной на силикагеле, микрокристаллической целлюлозе и пенополиуретане. Разработаны методики определения ртути(II) в водах различного происхождения и плазме крови; свинца(II) – в вытяжках из почв различного типа; метилртути – в морской воде.