ИСТИНА

Актуальность проблемы. Злокачественные новообразования занимают третье место в списке причин смертности от болезней в развитых странах. На сегодняшний день лекарственные препараты в традиционных лекарственных формах для лечения онкологических заболеваний с одной стороны не полностью проявляют терапевтический потенциал заключенных в них биологически активных лекарственных веществ (ЛВ), а с другой стороны не устраняют их побочного отрицательного действия. Большинство химиопрепаратов, применяющихся в онкологии, обладают высокой токсичностью, что вызывает тяжелые осложнения и снижает качество жизни пациента. Более того, токсичностью нередко обладает сама лекарственная форма, в которую заключено действующее ЛВ. Например, в широко используемых в клинике традиционных противоопухолевых препаратах Паклитаксела действующее ЛВ, обладающее высокой токсичностью и рядом побочных эффектов, заключено в лекарственную форму на основе полиоксиэтилированного касторового масла, кремафора, который обладает собственной токсичностью: аллергогенностью, нефротоксичностью, кардиотоксичностью, нейротоксичностью. Кроме того, при лечении таких хронических заболеваний, как опухолевые, и при использовании токсичных противоопухолевых препаратов возникает необходимость длительного поддержания определенной системной или локальной концентрации ЛВ, не превышающей токсический уровень. Одним из подходов к решению данной проблемы является применение систем пролонгированного высвобождения ЛВ из полимерных микро- и наночастиц. Связывание ЛВ с полимерными микро- и наночастицами и пролонгированное высвобождение из них с постоянной скоростью ЛВ обеспечивает длительное поддержание необходимой концентрации (без превышения токсического уровня) действующего ЛВ системно или локально в опухоли в течение всего заданного периода терапии заболевания. Тем самым, устраняется необходимость дополнительного многократного введения лекарства, упрощается применение препарата, снижается токсичность и побочные эффекты препарата, улучшается его фармакокинетика, улучшается биодоступность ЛВ, появляются возможности локализованного направленного лекарственного действия, повышается эффективность препарата, снижается стоимость и длительность лечения. Однако, разрабатываемые и исследуемые в настоящее время лекарственные формы на основе полимерных микро- и наночастиц также нередко обладают существенными недостатками, прежде всего: токсичностью из-за низкой биосовместимости используемых полимеров и неудовлетворительной кинетикой высвобождения ЛВ и биодеградации микрочастиц, не поддающихся регуляции. Поэтому в последнее время такие биополимеры микробиологического происхождения, как поли(3-оксибутират) (ПОБ) и его сополимеры привлекают все большее внимание благодаря их способности к биоразложению и высокой биосовместимости, что делает их пригодными для создания новых лекарственных форм. Ранее было показано, что ПОБ обладает высокой биосовместимостью и способностью как к гидролитической и ферментативной деградации in vitro, так и биоразложению в тканях млекопитающих in vivo. Более того, способность ПОБ к образованию сополимеров и композитов с другими полимерами позволяет варьировать свойства полимерной основы, тем самым, влияя на характер её взаимодействия с ЛВ. Это в свою очередь позволяет регулировать кинетику высвобождения ЛВ из полимерных микро- и наночастиц, изменяя тем самым и их фармакокинетические характеристики. Такой подход позволит создавать препараты на основе полимерных микро- и наночастиц с широким спектром фармакокинетических характеристик, которые важно учитывать при выборе терапии того или иного заболевания. Следует отметить также, что в настоящее время лекарственные препараты пролонгированного действия отечественного производства на основе биоразлагаемых полимеров отсутствуют. Таким образом, целью данной работы являлось создание и исследование лекарственных систем пролонгированного действия для оптимизации их свойств за счет использования нового сополимера ПОБ, а также композитных добавок к ПОБ в полимерной основе микро- и наночастиц. В соответствии с целью исследования были сформулированы следующие задачи: 1. Синтез нового сополимера полиоксибутират-ПЭГ и исследование физико-химических свойств и биосовместимости. 2. Изучение влияния различных композитных добавок в полимерной основе на физико-химические и фармакокинетические свойства микрочастиц (на примере частиц с модельным веществом). 3. Разработка эффективного метода получения наночастиц. 4. Получение и изучение физико-химических свойств микро- и наночастиц с противоопухолевыми препаратами с различным составом полимерной матрицы (гомополимер, сополимер и композитные добавки). 5. Исследование биологической активности полученных микро- и наночастиц с противоопухолевыми препаратами in vitro и in vivo. Научная новизна. В ходе данной работы впервые был разработан метод биосинтеза нового биосовместимого и биоразлагаемого сополимера ПОБ-ПЭГ культурой Azotobacter chroococcum 7Б. Подобраны оптимальные условия для накопления его клетками культуры, изучены его физико-химические свойства. Процесс биосинтеза позволяет регулировать молекулярную массу синтезируемого ПОБ. Впервые исследовано влияние различных композитных добавок на кинетику высвобождения ЛВ; определены компоненты, меняющие характер кинетики выхода ЛВ, что позволяет создавать полимерные лекарственные системы с заданными свойствами. Впервые разработан эффективный метод получения наночастиц из ПОБ и его сополимеров. Изучена биологическая активность микро- и наночастиц из ПОБ, содержащих противоопухолевые препараты (паклитаксел и этопозид) на различных культурах клеток (клетки рака груди человека линии MCF-7 и клетки гепатомы мыши линии MH-22a). Показана их бόльшая эффективность по сравнению с традиционными противоопухолевыми препаратами. Показан эндоцитоз полимерных наночастиц опухолевыми клетками, повышающий их цитостатическую активность. Показано снижение острой токсичности паклитаксела в полимерных частицах in vivo в сравнении с традиционной лекарственной формой. Впервые показано повышение противоопухолевой эффективности полимерных форм по критерию локального торможения роста опухоли. Практическая значимость работы. Получен новый биосовместимый и биоразлагаемый сополимер биоматериал – сополимер ПОБ-ПЭГ, пригодный для медицинского применения. Полученные в настоящей работе системы биополимерных частиц из бактериального ПОБ и нового сополимера ПОБ-ПЭГ позволят избежать осложнений, связанных с воспалительной тканевой реакцией при применении полимеров, полученных химическим путем (полилактидов и полигликолидов, традиционно применяемых в медицинской практике). Разработанные биополимерные системы микро- и наночастиц с включением противоопухолевых препаратов обладают пониженной острой токсичностью и бόльшей эффективностью по сравнению с традиционными лекарственными формами . Полученные результаты могут быть использованы для создания новых отечественных лекарственных форм химиотерапевтических препаратов пролонгированного действия. Апробация работы. Основные положения диссертационной работы были доложены на Седьмой Международной встрече по фармацевтике, биофармацевтике и фармацевтическим технологиям (Мальта, Валетта, март 2010), на Двадцать шестой ежегодной научной встрече Американского сообщества гипертензии (США, Нью-Йорк, май 2010), на Первой научно-практической конференции «Высокие технологии, фундаментальные и прикладные исследования в физиологии и медицине» (Санкт-Петербург, ноябрь 2010), на Международной конференции MipTec (Швейцария, Базель, сентябрь 2010) Четвертой Всероссийской конференции по наноматериалам «НАНО-2011» (Москва, март 2011), на Двадцать седьмой ежегодной научной встрече Американского сообщества гипертензии (США, Нью-Йорк, май 2011), на Второй научно-практической конференции «Высокие технологии, фундаментальные и прикладные исследования в физиологии и медицине» (Санкт-Петербург, ноябрь 2011), на Восьмой Международной встрече по фармацевтике, биофармацевтике и фармацевтическим технологиям (Турция, Стамбул, март 2012), на Международной конференции TechConnect World (США, Санта-Клара, июнь 2012), на Международной конференции EuroNanoForum 2013 (Ирландия, Дублин, июнь 2013). Публикации. По теме диссертации опубликовано 3 статьи в журналах из перечня ВАК ведущих рецензируемых научных журналов и изданий, 4 статьи в зарубежных рецензируемых журналах, 4 статьи в сборниках статей по материалам конференций (2 отечественные и 2 зарубежные), отражающие основной объем диссертационной работы. Результаты работы также были представлены на 14 международных и всероссийских конференциях. Структура и объем работы. Диссертационная работа изложена на 182 страницах машинописного текста и состоит из следующих разделов: введение, обзор литературы, материалы и методы, результаты и их обсуждение, заключение, выводы, список цитируемой литературы, содержащий ссылки на 350 источников. Диссертация иллюстрирована 53 рисунками, содержит 20 таблиц.