ИСТИНА

1. Предложен комплексный биохимический подход для характеристики начальных этапов функционирования системы репарации неканонических пар нуклеотидов ДНК (MMR). Этот подход позволяет оценить влияние модифицированных гетероциклических оснований (в том числе и в ДНК-«мисматче») на активацию репарации, локализацию белка MutS на модифицированной ДНК, сродство MutS к ДНК-лигандам, формирование изгиба двойной спирали ДНК в комплексе с MutS и эффективность обмена АДФ в АTФазном домене этого белка. 2. Впервые показано, что остаток тимидингликоля (Tg), введённый в кольцевые ДНК в составе пар G/Tg и A/Tg, препятствует активации системы MMR вследствие снижения сродства MutS к тимидингликольсодержащей ДНК по сравнению с дуплексом, содержащим пару G/T. Остаток тимидингликоля не способствует формированию изгиба ДНК при взаимодействии с MutS и стимулированию обмена АДФ белком MutS. Показано, что собственно дестабилизация двойной спирали не является необходимым и достаточным фактором в узнавании белком MutS дефекта в ДНК. 3. Предложены ДНК-лиганды, содержащие дисульфидную группу в углеводофосфатном остове, для ковалентной фиксации короткоживущих комплексов MutS на ДНК. Подобраны и оптимизированы условия формирования и последующего выделения конъюгатов мутантных форм MutS, содержащих единичный остаток Cys, с реакционноспособными ДНК. 4. Показано, что белок MutS, ковалентно связанный с G/T-содержащим дуплексом, находится в «начальном» узнающем комплексе, характеризующемся изгибом ДНК. Обнаружено АТФ-зависимое формирование «окончательного» узнающего комплекса MutS с ДНК, сопровождающееся конформационным переходом дуплекса в форму, не имеющую характерного изгиба двойной спирали. 5. Впервые продемонстрировано, что фиксация MutS в области «мисматча» не препятствует активации системы MMR.