![]() |
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ИСТИНА ЦЭМИ РАН |
||
Формула изобретения 1. Рекомбинантная плазмида pESAT6-CFP10-DBD, представленная нуклеотидной последовательностью №1, обеспечивающая экспрессию рекомбинантного белка ESAT6- CFP10-DBD, состоящего из полноразмерного белка ESAT6-CFP10 Mycobacterium. tuberculosis, Gly-Ser спейсера, декстрансвязывающего домена декстрансукразы Leuconostoc citreum KM20, размером 4128 п.н., состоящая из следующих структурных элементов: - искусственный бактериальный оперон рекомбинантного белка Е8АТCFP-DBD, включающий: промоторную область бактериофага Т5 (7-87 п.н.), ген рекомбинантного белка ESAT-CFP-DBD (117-1226 п.н), нетранслируемую область терминации транскрипции (1256-1350 п.н.); - бактериальный оперон бета-лактамазы, обеспечивающий устойчивость к ампициллину (3063-3923 п.н.); - бактериальный участок инициации репликации типа ColEl (2295-2305 п.н.), обеспечивающий репликацию плазмиды в штаммах E.coli. 2. Рекомбинантный штамм Escherichia coli Ml5 [pREP4, pESAT6CFP10-DBD], полученный трансформацией штамма E.coli Ml5 [pREP4] плазмидой по п.1, продуцент белка ESAT6-CFP10-DBD. 3. Способ получения, иммобилизации, концентрирования и очистки рекомбинантного белка ESAT6-CFP10-DBD на декстране, включающий: - выращивание клеток штамма Е. coli M15 [pREP4, pESAT6-CFP10DBD] по п.2; - иммобилизацию белка ESAT6-CFP10-DBD в составе клеточных экстрактов штамма E.coli Ml 5 [pREP4, pESAT6-CFP10-DBD] на декстрановом сорбенте за счет аффинного взаимодействия при процедуре инкубации с последующей отмывкой от несвязавшихся бактериальных белков, при этом происходит концентрирование целевого продукта и его очистка; - выделение целевого продукта. 4. Рекомбинантный белок ESAT6-CFP10-DBD с молекулярной массой 26,4 кДа, включающий полноразмерный белок ESAT6-CFP10 с последовательностью № 2, GlySer спейсер с последовательностью № 3, декстрансвязывающий домен декстрансукразы из L. citreum KM20 с последовательностью № 4. 5. Иммуногенная композиция, содержащая белок по п.4 ESAT6-CFP10DBD, иммобилизованный на декстране, специфически активирующая Т-лимфоциты, синтезирующие ИФН-гамма при стимуляции антигенами микобактерий.