ИСТИНА

Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к способу создания клеточной модели лейкоза для моделирования и изучения процессов, происходящих в лейкозных клетках. Способ направлен на выявление тех единичных клеток в популяции, в которых произошла транслокация, и их отбор. Первичный отбор осуществляют по флуоресценции репортерного белка, и гарантия того, что все необходимые для индукции транслокации элементы (гены Cas9 и РНК-гидов) попали в клетку, обеспечивается тем, что все эти элементы вместе с геном флуоресцентного белка собраны в одну плазмиду. Такая плазмида для индукции новой транслокации создается на основе универсального вектора в два шага клонирования. Для выявления транслокации используют ПЦР, причем без отдельной стадии выделения ДНК (т.н. прямая ПЦР), комбинируя этот подход с вложенной ПЦР, повышающей чувствительность метода. Для надежного получения клеточной линии с транслокацией с вероятностью не менее 0,95 может проводиться предварительная проверка эффективности РНКгидов и подсчет частоты транслокаций. Основываясь на частоте транслокаций, подбирают оптимальную стратегию клонирования на субпопуляции и стратегию ПЦРанализа с объединением нескольких образцов в одну реакцию. Клонирование проводят с помощью клеточного сортера. Полученные моноклональные линии характеризуют на предмет наличия транслокации, секвенируют область перестройки, показывают экспрессию продукта слитого гена и могут далее использовать для заявляемых целей. Изобретение позволяет получить моноклональные линии с транслокациями в кратчайший срок и с минимальными затратами времени и ресурсов лаборатории. 20 з.п. ф-лы, 5 ил., 1 пр.