ИСТИНА

Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к генетической инженерии. Была сконструирована рекомбинантная плазмидная ДНК pHpFDH_HisA, содержащая модифицированный ген hpfdh_hisa, кодирующий мутантную `НАД+-зависимую формиатдегидрогеназу (КФ 1.2.1.2, HpFDH_HisA) c дополнительной на N-конце фермента последовательностью из шести остатков гистидина и одного остатка аланина. Введение на N-конец фермента дополнительной последовательности His6Ala приводит к повышению термостабильности и позволяет в одну стадию получать препараты высокоочищенного фермента. Для обеспечения высокой эффективности экспрессии в целевом штамме-продуценте в модифицированном гене HpFDH_HisA в качестве стоп кодона используется тандем триплетов TAATAA вместо триплета TGA в исходном гене. Полученная плазмида позволяет проводить экспрессию включенного в нее гена hpfdh_hisa в клетках Escherichia coli. В результате трансформации штамма E.coli BL21(DE3) предложенной плазмидой получен новый рекомбинантный штамм-продуцент E.coli BL21 (DE3))/pHpFDH_HisA ВКПМ В-14559, обеспечивающий суперэкспрессию HpFDH_HisA в активной форме. 2 н.п. ф-лы, 6 ил., 4 табл., 4 пр.