ИСТИНА

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к способу оценки степени пролиферации лимфоцитов с помощью маркерных генов методом полимеразной цепной реакции в реальном времени (ПЦР РВ). Способ включает добавление в часть лунок с лимфоцитами митогенов или исследуемых веществ, инкубацию содержимого лунок, отбор содержимого лунок, лизис клеток и выделение нуклеиновых кислот. Ставят реакцию обратной транскрипции (OT) с праймерами для генов tpa и cdc2: праймер для OT с мРНК гена tpa 5'-CATCTTCATCTGACTCTTC-3', праймер для OT с мРНК гена cdc2 5'-CTGGAGTTGAGTAACGAG-3'. Проводят ПЦР РВ с полученной кДНК на специфических праймерах и с использованием меченых олигонуклеотидов на гены tpa и cdc2: для гена tpa прямой праймер 5'-TGTCGTGTCAGACCTTGAAGC-3', обратный праймер 5'-CCTTGGATTTCTTGCTTGTGAC-3', зонд (FAM)-5'-TGTACCACTGTCTCAAGCCCTCCTGC-3'-(BHQ1), для гена cdc2 прямой праймер 5'-CTTCACTTGTTAAGAGTTATTTATAC-3', обратный праймер 5'-CCAGAGTGTTACTACCTCATGTG-3', зонд (FAM)-5'-TGCCTTGCCAGAGC(FdT)TTTGGAATAC-3'-(BHQ1). Выражают степень пролиферации лимфоцитов в индексе пролиферации, который представляет собой число, показывающее, во сколько раз увеличивается количество мРНК гена tpa и/или cdc2 в процессе культивирования лимфоцитов с/без добавления ФГА или исследуемого вещества по сравнению с количеством мРНК этих генов в свежевыделенных из крови здорового донора лимфоцитах. Предложенное изобретение позволяет непосредственно следить за числом делящихся клеток, оценивая степень экспрессии генов, участвующих и регулирующих клеточное деление. 4 ил., 4 пр.