|
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ИСТИНА ЦЭМИ РАН |
||
Влияние ингибиторов везикулярного транспорта на внутриклеточное распределение, темновую и световую цитотоксичность хлорина е6НИР
Effect of vesicular transport inhibitors on intracellular distribution, light and darkness cytotoxicity of chlorin e6
- Руководитель НИР: Рамонова А.А.
- Участники НИР: Архипова А.Ю.
- Подразделение: Биологический факультет
- Срок исполнения: 1 февраля 2016 г. - 31 декабря 2016 г.
- Номер договора (контракта, соглашения): 16-34-01308 мол_а
- Номер ЦИТИС: 116012250010
- Тип: Фундаментальная
- Приоритетное направление научных исследований: Физиологические механизмы деятельности, развития и устойчивости организма человека и животных
- ПН России: Науки о жизни
- Направление технологического прорыва России: Медицинские технологии и лекарственные средства
-
Рубрики ГРНТИ:
- 34.45.05 Методы доклинического исследования и отбора лекарственных средств
- 34.17.09 Фотофизические и фотохимические процессы в биологии
-
Ключевые слова:
глиома крысы с6, ингибиторы везикулярного транспорта, клеточные мембраны, хлорин е6, фотодинамическая терапия
-
Описание:
Фотодинамическая терапия (ФДТ) является минимально инвазивной терапевтической методикой лечения онкологических и неонкологических заболеваний. Этот подход основан на местном или общем применении и избирательном накоплении и / или удерживании фотосенсибилизирующего агента (фотосенсибилизатора) в опухолевой ткани с последующим облучением видимым светом с длиной волны соответствующей спектру поглощения фотосенсибилизатора. Фотодинамическая терапия опухолей является одним из динамично развивающихся направлений современной медицины. Ее развитие требует создания все более эффективных фотосенсибилизаторов - химических соединений, способных в результате поглощения света генерировать активные формы кислорода, которые вызывают повреждение клеточных компонентов. Эффективные фотосенсибилизаторы обладают способностью избирательно накапливаться в опухолевых тканях. Фотодинамическое воздействие на клетки приводит повреждению мембранных компонентов клеток, включающее повреждение как белков, так и липидов, что в свою очередь приводит к повреждениям практически всех внутриклеточных органелл. В связи с этим, важным фактором эффективности фотосенсибилизаторов является внутриклеточная локализация. В зависимости от типа клеток, выбранного сенсибилизатора и условий освещения, повреждения различных компонентов клетки играют различную роль. Знание особенностей транспорта будет способствовать разработке таких вариантов фотосенсибилизаторов, действующих внутри клетки, которые смогут направляться по максимально эффективному пути до места своего назначения. В качестве конкретных задач проекта планируется: 1) Выявить органеллы, вовлечённые во внутриклеточный транспорт хлорина е6 и его производных; 2) Исследовать воздействие ингибиторов внутриклеточного транспорта на распределение фотосенсибилизатора в экспериментах in vitro; 3) Исследование взаимодействия фотосенсибилизаторов с клеточными мембранами в модельной системе с использованием эритроцитов мыши.
- Добавил в систему: Рамонова Алла Аликовна
Источник финансирования НИР
| грант РФФИ |
Этапы НИР
| # | Сроки | Название |
| 1 | 1 февраля 2016 г.-31 декабря 2016 г. | Влияние ингибиторов везикулярного транспорта на внутриклеточное распределение, темновую и световую цитотоксичность хлорина е6 |
| Результаты этапа: Метод ФДТ основан на использовании препаратов – фотосенсибилизаторов (ФС), которые вводятся в организм, как правило, системно (внутривенно) в форме водного раствора или водной дисперсии, при последующем воздействии на патологический участок световым облучением с определенной длиной волны. В области создания новых фотосенсибилизаторов большое внимание уделяется различным производным хлорофилла. Хлорин е6 уже зарекомендовал себя как эффективный сенсибилизатор в ФДТ, но на сегодняшний день ведутся разработки новых производных, которые бы полностью удовлетворяли требованиям, предъявляемым к сенсибилизаторам. Неотъемлемой частью этих разработок и изучения новых производных является детальное исследование особенностей внутриклеточного распределения ФС, механизмов активации фотоиндуцированных процессов и механизмов последующей гибели опухолевых клеток – мишеней при фотодинамическом действии сенсибилизаторов. В результате выполнения первого этапа проекта был разработан дизайн экспериментов, включающий подбор условий для проведения экспериментов, в том числе модификация МТТ-теста для проведения сравнительных исследований без и в присутствии ингибиторов везикулярного транспорта - колхицина, брефелдин А, моненсина. В результате разработки были определены концентрации используемых компонентов и последовательность их внесения, время инкубации клеток с ингибиторами везикулярного транспорта и фотосенсибилизатором, дозы облучения и проверяемые параметры. Также были определены условия для проведения исследований методом конфокальной лазерной сканирующей микроскопии в экспериментах in vitro. Разработанные модельные системы для изучения методом КЛСМ механизмов проникновения борхлорина в клетку и выявления его локализации в клеточных органеллах были использованы для исследования внутриклеточного распределения фотосенсибилизатора и витальных трейсеров, специфичных для эндоплазматического ретикулума, аппарата Гольджи и лизосом в экспериментах in vitro на клетках глиомы крысы С6. Выполненные эксперименты по выявлению органелл, вовлечённых во внутриклеточный транспорт хлорина е6, и исследование совместного распределения (ко-локализация) хлорина е6 с маркерами клеточных органелл показали, что преимущественно исследуемый фотосенсибилизатор выявлялся в аппарате Гольджи, в эндоплазматическом ретикулуме и в лизосомах. Исследование темновой цитотоксичности и фотодинамической активности фотосенсибилизатора хлорина е6 с использованием стандартных и модифицированных МТТ-тестов показали, что фотосенсибилизатор обладает низкой темновой токсичностью: так ЛД50 составляет 7 мкМ, а ЛД100 более 100 мкМ, в то же время для фотоиндуцированной токсичности эти показатели были следующими ЛД50 – 1,3 мкМ, а ЛД100 – 1,5 мкМ. | ||
Прикрепленные к НИР результаты
Для прикрепления результата сначала выберете тип результата (статьи, книги, ...). После чего введите несколько символов в поле поиска прикрепляемого результата, затем выберете один из предложенных и нажмите кнопку "Добавить".