ИСТИНА

Разработка уточнений важнейших теоретических и прикладных проблем учения о фоновых и предопухолевых процессах и научное обоснование основных принципов совершенствования их применения в целях дифференциальной диагностики при проведении патолого-анатомических исследований.

Key words: pathology, morphogenesis, tumors, precancerous lesions. Target setting^ Development of clarifications of the most important theoretical and applied problems of the doctrine of background and precancerous processes and scientific substantiation of the basic principles of improving their application for the purpose of differential diagnostics during pathological and anatomical studies. Research objectives: 1) Study of the morphogenesis of background processes. 2) Study of morphological features and immunophenotype of precancerous processes. 3) Study of molecular characteristics and prognostic potential of tumor stromal cells. 4) Study of the controllability of background and precancerous lesions from the standpoint of searching for the main directions of possible influence on the reduction of morbidity and mortality from neoplasms. Object of study: Biopsy (operational) material for background, precancerous lesions and human tumors. Research methods: histological, immunohistochemical, molecular biological, statistical methods.

1) Изучение морфогенеза фоновых процессов. 2) Изучение морфологических особенностей и иммунофенотипа предопухолевых процессов. 3) Изучение молекулярных особенностей и прогностического потенциала клеток опухолевой стромы. 4) Изучение управляемости фоновыми и предопухолевыми поражениями с позиций поиска основных направлений возможного влияния на снижение заболеваемости и смертности от новообразований.

Научный коллектив имеет многолетний опыт исследований в области новообразований пищеварительного тракта, все публикации прошлых лет в установленном порядке внесены в систему ИСТИНА.

1. По теме текущего этапа НИР «Идентификация опухоль-ассоциированных фибробластов в опухолях толстой кишки». Проведены идентификация и оценка уровня экспрессии маркеров CAF (αSMA, FAP, PDGFRα, PDGFRβ и POD). В интактной слизистой оболочке маркеры POD, FAP, PDGFRα и PDGFRβ не экспрессировались, а экспрессия αSMA наблюдалась в мышечной пластинке слизистой оболочки, а также в перикриптальных фибробластах. Корреляционный анализ показал сильную обратную связь между уровнем αSMA и FAP в центральной зоне опухоли (r = 0,79, p=0,034), что свидетельствует о разном биологическом значении маркеров FAP и αSMA в отношении CAF. Данные о статистически достоверной колокализации маркеров αSMA+FAP, αSMA+PDGFRα и POD+PDGFRα в колоректальном раке получены впервые. Впервые выявлены различия в локализации экспрессии маркеров относительно опухолевых (эпителиальных) комплексов: в части случаев ближайшим слоем оказался αSMA, а в части ‒ POD или PDGFRβ. Также отмечены смешанные случаи, где внутренний слой представлен сразу двумя маркерами в зависимости от зоны. Выявленные впервые различия в расположении маркеров относительно опухолевых (эпителиальных) комплексов стали возможны благодаря идентификации CAF с помощью технологии дуплексной метки на одном срезе. Полученные свидетельствуют о гетерогенности популяции CAF, и демонстрируют актуальность дальнейших исследований их роли в развитии колоректального рака. Перспективным может оказаться поиск корреляций между клинико-морфологическими характеристиками опухоли и молекулярно-биологическими особенностями внутреннего слоя CAF. С помощью технологии дуплексной метки впервые изучена экспрессия POD в CAF вокруг опухолевых почкований в инвазивном крае аденокарциномы толстой кишки. Показано, что выраженность экспрессии POD в CAF вокруг опухолевых почкований не отличается от выраженности реакции в самом инвазивном крае опухоли (p<0,01), что исключает необходимость оценивать реакцию POD именно вокруг опухолевых почкований. Выявленные взаимосвязи между наличием опухолевых почкований и глубиной инвазии/наличием метастазов в регионарные лимфоузлы подтверждают их про-гностическое значение. Отсутствие статистической взаимосвязи между уровнем POD в CAF вокруг почкований и глубиной инвазии/наличием метастазов свидетельствуют об отсутствии прогностической роли подопланин-положительных CAF. Впервые описана более выраженная экспрессия POD в CAF вблизи муцинозных комплексов, однако причина и возможное клиническое значение остается неясным. Опубликовано 6 статей [1, 2, 3, 4, 5, 14]. 2. Продолжены ранее начатые исследования молекулярного профи-ля, иммунного микроокружения и вирусного канцерогенеза опухолей пищеварительного тракта. Установлено, что LMP-1-негативные опухоли желудка с экспрессией LMP-1 в эпителии перитуморальной области характеризовались наибольшей плотностью инфильтрации CD4+ лимфоцитами в центральной части опухоли; наибольшей плотностью инфильтрации CD8+ лимфоцитами в слизистой оболочке перитуморальной области (p=0,0190); наибольшей плотностью инфильтрации макрофагами в слизистой оболочке перитуморальной области (p=0,2492); наибольшей плотностью инфильтрации CD1a+ клетками в слизистой оболочке перитуморальной области (p=0,1503). Высокая плотность ин-фильтрации CD1a+ клетками была характерна для LMP-1-позитивных и LMP-1-негативных опухолей (p=0,0813). Персистенция вирусного антигена LMP-1 в железистом эпителии перитуморальной области в исследованной выборке не имеет прогностического значения, но характеризуется выражен-ной тенденцией в сторону отрицательной прогностической значимости (RR=1,7718; p=0,0885). Впервые продемонстрирована возможность использования системы автоматического анализа для оценки иммунного микроокружения при раке желудка. Предложенная шкала оценки иммунного микроокружения характеризуется умеренным уровнем трудоемкости и достаточной точностью за счет использования автоматического морфометрического анализа. Установлено, что оценка иммунного микроокружения (на примере CD8+ клеток при раке желудка) в участках морфологически нормальной слизистой оболочки перитуморальной области имеет большее прогностическое значение по сравнению с общепринятой оценкой в центральной части опухоли. Впер-вые показано, что высокая плотность инфильтрации морфологически нормальной слизистой оболочки перитуморальной области при раке желудка значимо ассоциирована с бóльшей глубиной инвазии, более продвинутой стадией опухолевого процесса, наличием эмболов в лимфатических сосудах, худшей общей пятилетней выживаемостью пациентов (независимый отрицательный прогностический фактор, сопоставимый по значимости со стадией опухолевого процесса). Установлено, что высокий уровень инфильтрации CD8+ лимфоцитами морфологически нормальной слизистой оболочки перитуморальной области является независимым неблагоприятным прогностиче-ским фактором. В связи с этим рекомендуем обязательный забор биопсийного материала из слизистой оболочки перитуморальной области на предоперационном этапе для морфометрической оценки инфильтрации CD8+ лимфоцитами. Показано, что в опухолевых эмболах при раке желудка наблюдается значимое увеличение экспрессии Е-кадгерина по сравнению с первичной опухолью, даже в случаях с аберрантной экспрессией белка (0 и 0,33). Вероятно, в этих случаях снижение или отсутствие Е-кадгерина в опухоли было обусловлено эпигенетическими механизмами (например, метилированием промотора гена CDH1). Это свидетельствует о том, что экспрессия маркера в опухоли не является константой и может быть отрегулирована самими опухолевыми клетками при необходимости. Е-кадгерин играет роль не только в поддержании целостности опухолевого эмбола, но и обеспечивает жизнеспособность этих клеток. Экспериментально показано, что Е-кадгерин обеспечивает безъякорный рост (ancorage independent growth) в сфероидах культуры клеток плоскоклеточного рака ротовой полости (HSC-3) и клеток саркомы Юинга, причем в последнем примере экспрессия Е-кадгерина увеличивалась при культивировании в условиях безъякорного роста. Безъякорный рост – способность клеток выживать и пролиферировать в отсутствие взаимодействия с внеклеточным матриксом, является одной из характеристик опухолевых клеток. При безъякорном росте сигналы от межклеточных взаимодействий подавляют аноикис (разновидность апоптоза, наступающая в ответ на неправильную адгезию клеток с внеклеточным матриксом). Таким образом, Е-кадгерин поддерживает целостность опухолевых эмболов, играет поддерживает жизнеспособность и рост опухолевых клеток, ингибирует апоптоз и является важным функциональным звеном метастазирования при раке желудка. Впервые показано значимое увеличение экспрессии Е-кадгерина в опухолевых эмболах по сравнению первичной опухолью желудка. Установлено, что наибольшее увеличение экспрессии Е-кадгерина в эмболах характерно для опухолей диффузного подтипа по классификации P.Lauren, а также для опухолей с наличием метастазов в регионарные лимфатические узлы, что доказывает важную роль Е-кадгерина в процессе метастатической диссе-минации при раке желудка. Опубликовано 6 статей [6, 7, 8, 9, 10, 15, 16]. 3. Продолжены ранее начатые исследования по смежным тематикам – рак молочной железы, общественное здоровье и организация здравоохранения. Опубликовано 2 книги [11, 12], 2 статьи [13, 19]. Рекомендации по внедрению результатов. Полученные результаты рекомендуются к внедрению при проведении прижизненных патолого-анатомических исследований биопсийного (операционного) материала при новообразованиях желудка и толстой кишки, и могут быть использованы для последипломного образования врачей-патологоанатомов. Уровень внедрения. Результаты внедрены в научную и практическую работу в отделе клинической патологии и патолого-анатомическом отделении МНОЦ МГУ имени М. В. Ломоносова, в преподавании курса патологи-ческой анатомии и клинической патологической анатомии на факультете фундаментальной медицины МГУ имени М. В. Ломоносова. Результаты исследований по смежной тематике (общественное здоровье и организация здравоохранения) внедрены в практическую работу по организации медицинской помощи взрослому населению Минздрава Чеченской Республики (совместно с кафедрой патологической анатомии ФГБОУ ДПО РМАНПО Минздрава России, Минздравом Чеченской Республики), и в порядок оформления медицинских свидетельств о смерти у пациентов с сахарным диабетом (совместно с НМИЦ эндокринологии Минздрава России, Российской ассоциацией эндокринологов, Российским обществом патологоанатомов).