ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
|
ИСТИНА ЦЭМИ РАН |
||
Аннотация: Точная и безошибочная передача генетической информации в процессе клеточного деления требует координации процессов репликации, компактизации и сегрегации геномов в пространстве и во времени. Активное реконфигурирование ДНК в ходе осуществления данных процессов происходит при участии конденсинов и когезинов - мультисубъединичных белковых комплексов на основе SMC-белков. Для высших эукариот характерна сложная многоуровневая пространственная организация генетического материала, что создает дополнительные сложности при осуществлении этих процессов. Способ упаковки хроматина, а следовательно и особенности его динамики и характер взаимодействия с конденсинами и когезинами, могут отличаться в различных функциональных доменах хромосом. Цель проекта - выяснение топологических взаимоотношений процесса репликации ДНК, установления когезии хроматид, сегрегации геномов и ассоциации конденсинов и когезинов с хромосомами. Методами прижизненных наблюдений за поведением трансгенных локусов хромосом, меченых in vivo, и иммунофлуоресцентной микроскопии с суперразрешением и иммуноэлектронной микроскопии в сочетании с молекулярными методами детекции взаимодействия сестринских хроматид будут изучены особенности пост-репликативной компактизации и сегрегации различных структурно- функциональных доменов хромосом и характер взаимодействия конденсинов/когезинов с высшими уровнями организации эукариотических хромосом.
грант РФФИ |
# | Сроки | Название |
1 | 1 апреля 2013 г.-31 декабря 2013 г. | Роль архитектурных белков хромосом в пост-репликативной реорганизации структурно-функциональных доменов хроматина |
Результаты этапа: | ||
2 | 13 марта 2014 г.-31 декабря 2014 г. | Роль архитектурных белков хромосом в пост-репликативной реорганизации структурно-функциональных доменов хроматина |
Результаты этапа: В ходе работы над проектом проведено исследование пострепликативной сегрегации сестринских хроматид на ультраструктурном уровне и динамики ассоциации когезинов с реплицированной ДНК с использованием корреляционной оптической микроскопии с суперразрешением и иммуноэлектронной микроскопии. Обнаружено, что репликация ДНК сопровождается временной посадкой дополнительных когезиновых комплексов на новосинтезированный хроматин. Последующая диссоциация когезинов по времени коррелирует с завершением репликации индивидуальных кластеров репликонов, но не приводит к детектируемой сегрегации хроматид в масштабе высших уровней организации хроматина (хромонемных фибрилл тол щиной 170-200 нм). Для анализа когезии хроматид на молекулярном уровне разработан метод ПЦР-детекции продуктов когезин-опосредованного лигирования сестринских хроматид - s3C (Sister Chromatids Conformatin Capture). | ||
3 | 1 апреля 2015 г.-31 декабря 2015 г. | Роль архитектурных белков хромосом в пост-репликативной реорганизации структурно-функциональных доменов хроматина |
Результаты этапа: Исследовано влияние преждевременного разрушения когезинового комплекса в интерфазе в результате экспрессии в клетках HEK с заменой эндогенных когезинов на мутантные формы Prescission-протеазы. Ультраструктурный анализ хроматиновых фибрилл высшего порядка в пост-репликативных клетках (содержащих две сестринские хроматиды), не показал видимой сегрегации хроматид на уровне хромонемных фибрилл толщиной 170-200 нм. Анализ баз данных результатов 3C-экспериментов не выявил статистически достоверных локусов преимущественного межхроматидного лигирования. В сочетани с низкой эффективностью детекции палиндромов, образующихся в результате такого лигирования, методом ПЦР этот факт предполагает, что данный подход требует дальнейшей оптимизации условий детекции. |
Для прикрепления результата сначала выберете тип результата (статьи, книги, ...). После чего введите несколько символов в поле поиска прикрепляемого результата, затем выберете один из предложенных и нажмите кнопку "Добавить".