|
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ИСТИНА ЦЭМИ РАН |
||
Роль архитектурных белков хромосом в пост-репликативной реорганизации структурно-функциональных доменов хроматинаНИР
- Руководитель НИР: Киреев И.И.
- Участники НИР: Жиронкина О.А., Стрелкова О.С., Черепанинец В.Д.
- Подразделение: Отдел электронной микроскопии
- Срок исполнения: 1 апреля 2013 г. - 31 декабря 2015 г.
- Номер договора (контракта, соглашения): 13-04-00885
- Номер ЦИТИС: 01201355555
- Тип: Фундаментальная
- Приоритетное направление научных исследований: другое
- ПН России: Науки о жизни
-
Рубрики ГРНТИ:
- 34.15.25 Молекулярная биология гена
- 34.19.17 Цитоморфология
- 34.23.23 Цитогенетика
-
Ключевые слова:
процесс клеточного деления, процесс репликации, конденсины и когезины, хроматин, трансгенные локусы хромосом, иммуноэлектронная микроскопия
-
Описание:
Аннотация: Точная и безошибочная передача генетической информации в процессе клеточного деления требует координации процессов репликации, компактизации и сегрегации геномов в пространстве и во времени. Активное реконфигурирование ДНК в ходе осуществления данных процессов происходит при участии конденсинов и когезинов - мультисубъединичных белковых комплексов на основе SMC-белков. Для высших эукариот характерна сложная многоуровневая пространственная организация генетического материала, что создает дополнительные сложности при осуществлении этих процессов. Способ упаковки хроматина, а следовательно и особенности его динамики и характер взаимодействия с конденсинами и когезинами, могут отличаться в различных функциональных доменах хромосом. Цель проекта - выяснение топологических взаимоотношений процесса репликации ДНК, установления когезии хроматид, сегрегации геномов и ассоциации конденсинов и когезинов с хромосомами. Методами прижизненных наблюдений за поведением трансгенных локусов хромосом, меченых in vivo, и иммунофлуоресцентной микроскопии с суперразрешением и иммуноэлектронной микроскопии в сочетании с молекулярными методами детекции взаимодействия сестринских хроматид будут изучены особенности пост-репликативной компактизации и сегрегации различных структурно- функциональных доменов хромосом и характер взаимодействия конденсинов/когезинов с высшими уровнями организации эукариотических хромосом.
- Добавил в систему: Киреев Игорь Игоревич
Источник финансирования НИР
| грант РФФИ |
Этапы НИР
| # | Сроки | Название |
| 1 | 1 апреля 2013 г.-31 декабря 2013 г. | Роль архитектурных белков хромосом в пост-репликативной реорганизации структурно-функциональных доменов хроматина |
| Результаты этапа: | ||
| 2 | 13 марта 2014 г.-31 декабря 2014 г. | Роль архитектурных белков хромосом в пост-репликативной реорганизации структурно-функциональных доменов хроматина |
| Результаты этапа: В ходе работы над проектом проведено исследование пострепликативной сегрегации сестринских хроматид на ультраструктурном уровне и динамики ассоциации когезинов с реплицированной ДНК с использованием корреляционной оптической микроскопии с суперразрешением и иммуноэлектронной микроскопии. Обнаружено, что репликация ДНК сопровождается временной посадкой дополнительных когезиновых комплексов на новосинтезированный хроматин. Последующая диссоциация когезинов по времени коррелирует с завершением репликации индивидуальных кластеров репликонов, но не приводит к детектируемой сегрегации хроматид в масштабе высших уровней организации хроматина (хромонемных фибрилл тол щиной 170-200 нм). Для анализа когезии хроматид на молекулярном уровне разработан метод ПЦР-детекции продуктов когезин-опосредованного лигирования сестринских хроматид - s3C (Sister Chromatids Conformatin Capture). | ||
| 3 | 1 апреля 2015 г.-31 декабря 2015 г. | Роль архитектурных белков хромосом в пост-репликативной реорганизации структурно-функциональных доменов хроматина |
| Результаты этапа: Исследовано влияние преждевременного разрушения когезинового комплекса в интерфазе в результате экспрессии в клетках HEK с заменой эндогенных когезинов на мутантные формы Prescission-протеазы. Ультраструктурный анализ хроматиновых фибрилл высшего порядка в пост-репликативных клетках (содержащих две сестринские хроматиды), не показал видимой сегрегации хроматид на уровне хромонемных фибрилл толщиной 170-200 нм. Анализ баз данных результатов 3C-экспериментов не выявил статистически достоверных локусов преимущественного межхроматидного лигирования. В сочетани с низкой эффективностью детекции палиндромов, образующихся в результате такого лигирования, методом ПЦР этот факт предполагает, что данный подход требует дальнейшей оптимизации условий детекции. | ||
Прикрепленные к НИР результаты
Для прикрепления результата сначала выберете тип результата (статьи, книги, ...). После чего введите несколько символов в поле поиска прикрепляемого результата, затем выберете один из предложенных и нажмите кнопку "Добавить".