| Результаты этапа: Настоящий проект исходно был направлен на исследование PAPP-A-зависимого пути
регуляции биодоступности IGF при различных формах гипертрофических изменений
в миокарде. На первом году при реализации данного проекта была проведена
разработка и валидация моделей право- и левожелудочковой форм гипертрофии
миокарда у взрослых крыс. Гипертрофию правого желудочка индуцировали в
результате введения монокроталина - алкалоида, который вызывает
монокроталинофую форму легочной гипертензии, и как, следствие,
гипертрофические изменения в миокарде. Гипертрофию левого желудочка вызывали,
используя реноваскулярный операционный подход.
Развитие обеих форм сердечной гипертрофии определяли по таким признакам, как
1)увеличение размера соответствующего желудочка сердца (правого -в МКТ-индуцированной гипертрофии, левого - в РВГ-гипертрофии), 2) возрастание
расчетных коэффициентов гипертрофии у МКТ и РВГ-крыс по сравнению с
контрольными, 3) повышение концентрации натрийуретического пептида B-типа в
крови в 3,7 раз у РВГ крыс по сравнению с контрольными, 4) повышение
артериального давления у РВГ-крыс в 1,5 раза по сравнению с контрольными(у
МКТ-крыс артериальное давление не изменялось, так как в данном случае
основное воздействие было направлено на большой круг кровообращения). В
процессе моделирования обеих форм гипертрофии экспериментальные животные чувствовали себя хорошо и были активны, что позволило предположить, что обе
формы индуцированной гипертрофии носили адаптивный, а не патологический
характер. В случае МКТ-индуцированной модели гипертрофические изменения в
миокарде были выражены более значительно, чем в случае РВГ-модели
кардиомиоцитов из контрольных и гипертрофированных сердец крыс.
Клетки, полученные из контрольных и гипертрофированных сердец, имели
морфологию, характерную для кардиомиоцитов. Методом иммунофлуоресцентного
окрашивания с использованием антител, специфичных к тропонину T - белку, чья
экспрессия характерна только для кардиомиоцитов, было показано, что
практически все клетки в полученной культуре представлены кардиомиоцитами, и
чистота полученной культуры составляет около 95%. Также было продемонстрировано, что жизнеспособность культур, выделенных из
гипертрофированных сердец по сравнению с контрольными кардиомиоцитами
снижается незначительно. Методом ФИА “сэндвич”-типа в полученной культуре
было продемонстрировано, что в случае кардиомиоцитов, полученных как из
сердец крыс с МКТ-индуцированной гипертрофией, так и из сердец с РВГ-индуцированной гипертрофией, концентрация BNP возрастала в 3,7 и 3,2 раза,
соответственно, что говорит о сохранении гипертрофического фенотипа в
кардиомиоцитах после их выделения из сердец крыс с обеими формами
индуцированной гипертрофии
Таким образом, в 2024 году в ходе выполнения текущего проекта были
смоделированы и разносторонне описаны две различные формы сердечной
гипертрофии у взрослых крыс. Данные модельные системы гипертрофии в
дальнейшем планируется использовать для исследования биодоступности
инсулиноподобного фактора роста (IGF) в результате PAPP-A-специфичного
протеолиза IGFBP-4.
|
