ИСТИНА

Целью исследований является разработка научных основ по использованию онконевральных антигенов в комплексе с рекомбинантным Hsp70 в иммунотерапии злокачественных опухолей различной этиологии, включая опухоли органов мочевыделительной системы. Ежегодно в мире выявляется около 10 миллионов новых случаев онкологических заболеваний, являющихся причиной смерти 250 из 100000 человек. Современные методы терапии позволяют излечивать значительное число онкологических больных, однако при прочих равных условиях вероятность положительного результата в большой степени зависит от своевременности начала лечения. Отсюда очевидна необходимость разработки новых и совершенствование существующих методов диагностики и лечения рака. В настоящее время одним из наиболее активно разрабатываемых подходов к лечению онкологических заболеваний является иммунотерапия, предполагающая подавление роста опухоли за счет индукция цитотоксических лимфоцитов (CTL), специфичных к антигенам опухоли. Необходимым условием получения специфического клеточного иммунного ответа является представление специализированными антиген-презентирующими клетками (АПК) антигенов опухоли CD8+ Т-лимфоцитам, который осуществляется благодаря процессу кросс-презентации, заключающемуся в способности АПК презентировать экзогенные антигены в составе главного комплекса гистосовместимости (MHC-I). Согласно литературным данным наибольшей иммуногенностыо обладают выделенные из опухолевых клеток белковые фракции, представляющие собой комплекс опухолевых антигенов с белком теплового шока Hsp70. Способность Hsp70 связываться с белковыми фрагментами определяет их участие в кросс-презентации различных антигенов и соответственно индукции специфического клеточного иммунного ответа. В связи с этим актуальным является поиск антигенов, способных эффективно образовывать комплекс с Hsp70 и вызывать индукцию цитотоксических лимфоцитов, специфичных к антигенам опухоли. Такими антигенами могут быть онконевральные или паранеопластические антигены – белки, которые в норме являются высокоспецифичными для нервной системы, но при злокачественной трансформации могут экспрессироваться также клетками раковой опухоли, локализованными вне нервной системы. Нейрональный Са2+-сенсор рековерин – первый фоторецепторный белок, для которого была показана способность аберрантно экспрессироваться в злокачественных опухолях. Произошло это в результате многолетних исследований паранеопластического неврологического синдрома – паранеопластической дегенерации сетчатки, которая, как оказалось, является следствием ответа иммунной системы на аберрантную экспрессию рековерина в злокачественной опухоли, локализованной вне нервной системы. Важная черта этого синдрома состоит в том, что в некоторых случаях его признаки проявляются за месяцы или даже года до того, как была обнаружена злокачественная опухоль, служащая его исходной причиной. Позднее аберрантная экспрессия была установлена для целого ряда фоторецепторных белков, представленных зрительным родопсином, трансдуцином, cGMP-фосфодиэстеразой-6, cGMP-зависимыми катионными каналами, гуанилилциклазой -1, родопсинкиназой и аррестином-1. Указанные онконевральные антигены были выделены в группу так называемых раково-сетчаточных антигенов (cancer-retina antigens). Экспрессия этих белков в опухолевых клетках может индуцировать аутоиммунный ответ, который проявляется в образовании аутоантител и/или специфических цитотоксических Т-клеток. Таким образом, выявление онконевральных (раково-сетчаточных) антигенов для различных типов рака, в частности, для рака почек и предстательной железы может быть использовано для поиска и расширения репертуара связываемых с Hsp70 опухолевых пептидов при разработке иммунотерапии этих злокачественных патологий.

Проведен анализ литературных данных, посвященных белкам зрительной системы (родопсин, трансдуцин, cGMP-фосфодиэстераза-6, родопсинкиназа, аррестин-1, гуанилатциклаза-1, рековерин), являющимся онконевральными, т.е. раково-сетчаточными антигенами. Написан аналитический обзор по теме «Белки зрительной трансдукции как онконевральные антигены». На основании проведенного анализа литературных данных выбраны 3 наиболее подходящих для последующего скрининга онконевральных (раково-сетчаточных) антигенов с учетом их иммуногенности в отношении гуморального и Т-клеточного ответа и корреляции их серореактивности с прогнозом течения онкологического заболевания. Получены 3 отобранных онконевральных (раково-сетчаточных) антигенов в виде рекомбинантных белков или белков, выделенных из природных объектов. Проведена очистка и проверка чистоты полученных препаратов. Проверена иммунореактивность полученных онко-невральных (раково-сетчаточных) антигенов с использованием соответствующих очищенных антител из рабочей коллекции. Подготовлены препараты полученных онконевральных (раково-сетчаточных) антигенов для выполнения следующей задачи НИР. Разработана отчетная документация в соответствии с требованиями Технического задания. Получены образцы сыворотки крови в совокупности от не менее 60-ти пациентов с диагностированным раком почки и предстательной железы, с учетом анамнеза заболевания. Проведен скрининг серийных образцов сыворотки крови, полученных от пациентов с диагностированным раком почки и предстательной железы, с целью выявления в них аутоантител против 3-х отобранных онконевральных (раково-сетчаточных) антигенов. Подведены итоги проведенного скринига, определены частоты встречаемости аутоантител против 3-х отобранных онконевральных (раково-сетчаточных) антигенов в образцах сыворотки крови, полученных от пациентов с диагностированным раком почки/предстательной железы, с учетом анамнеза заболевания. Разработана отчетная документация в соответствии с требованиями технического задания и актов Заказчика. Произведен отбор онконевральных (раково-сетчаточных) антигенов, характеризующихся наибольшей частотой встречаемости аутоантител против них в образцах сыворотки крови, полученных от пациентов с диагностированным раком почки/предстательной железы. Сделан анализ доступных данных о различных уровнях структуры отобранных онконевральных (раково-сетчаточных) антигенов. Оценена возможность и условия получения комплекса Hsp70 с отобранными онконевральными (раково-сетчаточными) антигенами. Проведен анализ первичной структуры отобранных онконевральных (раково-сетчаточных) антигенов на наличие иммунодоминантных Т-клеточных эпитопов. Выбраны онконевральные (раково-сетчаточные) антигены, являющиеся наиболее перспективными объектами для последующего исследования применимости их комплексов с рекомбинантным Hsp70 в качестве действующего вещества в вакцинах для иммунотерапии уронефрологических онкозаболеваний. Оценена эффективность полученных результатов в сравнении с современным научно-техническим уровнем. Образцы антител против 3-х онконевральных (раково-сетчаточных) антигенов, отобранных по результатам проведенной НИР, переданы заказчику.