| Результаты этапа: Проведены работы по анализу полиморфизма 6 генов (NOS1, NOS2, NOS3, SNAP25, MTR, ACE) по 6 маркёрам (5 однонуклеотидных замен, 1 инсерция/делеция) в выборке условно-здоровых (n=365) и пациентов с мигренью (n=180). Оценено влияние генотипов и аллелей генов CCK1R (замены rs1799723, rs1800908, rs1800857), CCK2R (rs1805002, rs1805000), CCK (rs1157184) в патогенезе мигрени. Показано влияние замены в гене DBH (rs1611115) на формирование клинической картины мигрени. Проведен анализ молекулярных межклеточных процессов при патогенезе мигрени. Нами впервые построена модель сигнальных путей патогенеза мигрени. Данная модель может быть использована для оценки эффектов полиморфных вариантов генов в патогенезе заболевания. Определены частоты аллелей и генотипов замен в генах CCK1R (rs1800908, rs1799723, rs1800857), CCK2R (rs1805002, rs1805000), CCK (rs11571842), DBH (19bp indel) и BDNF (rs2049046, rs6265) в группе больных паническим расстройством (n=131) и контрольной группе (n=363). Показаны ассоциации аллеля T замены rs1800908 (CCK1R) и аллеля A замены rs2049046 (BDNF) с паническим расстройством. Для аллеля T замены rs1800908 (CCK1R) выявлен доминантный тип наследования, а для аллеля A замены rs2049046 (BDNF) – рецессивный. Выявлен наиболее часто встречающийся у пациентов с паническим расстройством комплексный гаплотип: сочетания аллелей rs1800908:T + rs1799723:A,A + rs1805000:C. Это свидетельствует о значимом вкладе рецепторов холецистокинина (CCK1R, CCK2R) в патогенез панических расстройств. Выявлены особенности экспрессии генов PLA2G7, TGFB1 и ACE у детей с анафилаксией и в контрольных группах методом ПЦР в реальном времени. Показано значимое снижение транскрипционной активности генов PLA2G7 и ACE при анафилаксии. Экспрессия гена TGFB1 значимо не меняется при анафилаксии по сравнению с контролем. Работа проводилась с использование тотальной РНК из крови пациентов с острой анафилактической реакцией (n=45), атопическим дерматитом (n=50) и контрольной группы без аллергических заболеваний (n=30). Построены сигнальные пути, описывающие механизмы активации/репрессии транскрипционной активности гена PLA2G7. Собраны образцы ДНК пациентов с псориазом, атопическим дерматитом и склеродермой. Для дальнейшего молекулярно-генетического анализа отобраны гены, предположительно способные принимать участие в патогенезе данных заболеваний.
Исследована экспрессия генов Grp и Iris, геномных гомологов генов ретровирусов у D.melanogaster, на уровне транскрипции и трансляции. Показано, что гены Grp и Iris транскрибируются в соматических тканях, при этом экспрессия гена Grp выявлена в тканях кишечника, а экспрессия гена Iris – в тканях корпуса. Показано, что белки Grp и Iris обнаруживаются в мембранной фракции. Выявлено, что присутствие функционального ретровируса gypsy в организме D.melanogaster вызывает повышение уровня экспрессии гена Grp, в отличие от гена Iris, в соматических тканях каркаса и не оказывает влияния на уровень экспрессии гена Iris. Таким образом, ген Grp задействован в иммунном ответе на ретровирусную инфекцию. Выявлено, что ген Grp индуцируется введением в организм B.cereus, ген Iris, по-видимому, не участвует в иммунном ответе и не индуцируется ни ретровирусной, ни бактериальной инфекцией. Исследовано воздействие на экспрессию генов Iris и Grp следующих стрессовых факторов: окислительного стресса, голодания, холодового и теплового шока. Обнаружено, что уровень экспрессии гена Grp повышается в ответ на голодание у самок D.melanogaster, а экспрессия гена Iris подавляется в ответ на тепловой шок, окислительный стресс и септическую травму. Проведен комплексный анализ экспрессии генов, участвующих в регуляции транспозиционной активности ретротранспозонов группы gypsy в линии SS D. melanogaster, мутантной по локусу flamenco: ago3, zuc, aub, hp1a, hp1b, hp1c, hp1d (rhino), hp1e. Показано, что в яичниках линии SS экспрессия генов системы РНК-интерференции не нарушена, но наблюдается пониженный уровень экспрессии гена hp1d в тканях яичников.
|
