ИСТИНА

Планируется провести на цитогеронтологической модели "стационарного старения" сравнительные исследования нескольких групп методов определения жизнеспособности культивируемых клеток и способов подсчета живых клеток; использовать несколько красителей (трипановый синий, метиленовый синий, нейтральный красный, MTT и родамин 123). Предполагается продолжить усовершенствование метода оценки способности культивируемых клеток к колониеобразованию. Часть экспериментов провести на световом и конфокальном микроскопах, часть - на проточном цитофлуориметре. Запланировано сравнение данных, получаемых при подсчете живых клеток на ростовой поверхности и в суспензии. Предполагается продолжить исследования влияния потенциального геропротектора "Quinton Marine Plasma" на пролиферацию и "стационарное старение" культивируемых клеток, а также эксперименты по определению в данной модельной системе "возраста" культуры с помощью оценки активности ассоциированной со старением бета- галактозидазы.

Получены принципиально новые данные по изучению влияния ультрамалых наночастиц золота на тиолиндуцированную деконденсацию ядерного хроматина в зрелых сперматозоидах мышей CBA/С57Bl/6 и мышей линии 129/IMG, мутантных по гену ДНК-полимеразы йота. В обоих случаях после инкубации в золе, содержащем наночастицы золота, при 23, 37 и 60°C в течение 30 мин и последующей 1-часовой обработки в растворе дитиотреитола (ДТТ) наблюдалось уменьшение числа ядер с полностью деконденсированным хроматином по сравнению с контролем. Правда, для популяции зрелых спермиев мышей линии 129/IMG этот эффект оказался менее выраженным. Также показано, что спермии мышей CBAхC57BL/6 и мышей линии 129/IMG, инкубировавшиеся в золе наночастиц золота при повышенной температуре (60°C), по-разному ведут себя под действием ДТТ. Важно отметить, что под действием ДТТ в спермиях мышей линии 129/IMG, инкубировавшихся в физиологическом растворе или золе золота, появлялось большое количество ядер с необычными и разнообразными формами, многие из которых выглядели как дегенеративные. У мышей-гибридов CBAхC57BL/6 морфологически аномальные ядра в большом количестве встречались в основном в популяции «озолоченных» гамет. Опыты с наночастицами золота указывают на потенциальную возможность существования каких-то тонких различий в упаковке дезоксинуклеопротеинового комплекса в зрелых гаметах самцов мышей-гибридов CBAхC57BL/6 и мутантных мышей линии 129/IMG. Впервые в семенниках мутантных мышей линии 129/IMG в популяции клеток Сертоли выявлены единичные тетраплоидные ядра, присутствие которых в данной клеточной популяции у половозрелых млекопитающих заслуживает особого внимания, так как указывает на потенциальную возможность пролиферативных процессов в популяциях высокодифференцированных клеток. В свою очередь, в популяции клеток Сертоли у мышей линии 129/IMG, подвергшихся мутагенному воздействию, были обнаружены клетки с протрузиями разных размеров, иногда содержащие глыбки околоядрышкового хроматина, микроядрами, остаточными хромосомными мостами, а также посттелофазные ядра; число клеток Сертоли в семенниках мутагенизированных животных увеличивалось в 2-3 раза по сравнению с контролем. Все это вместе взятое подтверждает положение о том, что высокодифференцированные, митотически инертные клетки Сертоли способны переходить к клеточным делениям в условиях потери ими оптимального состояния. Продолжено изучение влияния эфирного масла орегано, фуллеренов и препарата "Quinton Marine Plasma" (QMP) на пролиферацию и "стационарное старение" (накопление "возрастных" изменений клеток при замедлении скорости размножения в пределах одного пассажа и дальнейшем их пребывании в стационарной фазе роста) культивируемых клеток. Продолжено изучение "стационарного старения" культивируемых клеток с помощью различных витальных красителей, а также взаимосвязи между стимулированной и нестимулированной активностью поли(ADP-рибоза)-полимеразы на разных стадиях "стационарного старения" клеток в культуре. Показано, что в находящейся в стационарной фазе роста культуре трансформированных клеток китайского хомячка растет со временем доля клеток, в которых определяется ассоциированная со старением бета-галактозидаза. Это служит дополнительным доказательством жизнеспособности развиваемой авторами концепции старения, постулирующей решающую роль ограничения пролиферации клеток в накоплении в них различных макромолекулярных дефектов, приводящих, в свою очередь, к ухудшению функционирования органов и тканей и дальнейшему увеличению вероятности смерти макроорганизмов. Изучая влияние изотонического раствора QMP на размножение и "стационарное старение" трансформированных культивируемых клеток китайского хомячка, ни в одном из экспериментов не обнаружили выраженного положительного действия QMP на исследованные показатели жизнеспособности клеточной культуры. Предположили, что QMP, как и многие другие исследованные авторами в последнее время потенциальные геропротекторы (2,4-динитрофенол в концентрациях, обеспечивающих мягкое разобщение, эфирное масло орегано, гидратированный C60-фуллерен и др.), может проявлять свое благотворное действие только на уровне целого организма, задействуя нейрогуморальные механизмы, отсутствующие в цитологических модельных системах.