ИСТИНА

Целью работы является проведение исследований, направленных на увеличение эффективности методов выделения и определения ДНК, основанных на использовании метода высокоспецифичной гибридизации. Основными задачами работы являются разра-ботка метода улавливания и концентрирования специфической ДНК из биологических образцов на аффинных микроматрицах с иммобилизованными олигонуклеотидными зондами, а также разработка метода высокочувствительной регистрации единичных дуплексов ДНК на носителях с использованием наноструктур золота и кремния в качестве метки на основе современных оптических методов детекции. Использование принципов аффинной очистки на основе микроматриц с иммобилизованными специфическими олигонуклеотидными зондами позволяет проводить выявление ДНК без предварительного культивирования клеток в среде и сократить время амплификации. Таким образом, происходит сокращение числа и времени проведения отдельных стадий пробоподготовки нуклеиновых кислот для идентификации.

Осуществлена разработка экспериментальных решений для нового метода регистрации единичных дуплексов ДНК на носителях с использованием наночастиц в качестве метки с использованием оптических методов. Проведено исследование возможности одновременного определения специфического и неспецифического сигналов на одном носителе с использованием секционного фотодиода и соответственного расположения лазерного излучения. Изготовлены экспериментальные образцы аффинных микроматриц, предназначен-ных для определения нуклеиновых кислот, специфичных для бактериальных ферментов бета-лактамаз СТХ-М и VIM типов, и нуклеиновых кислот, соответствующих консерва-тивным участкам генов E. coli. Выполнена разработка in vitro модели для оценки эффективности применения полученных аффинных микроматриц для выявления нуклеиновых кислот для целей клинической диагностики. Разработан метод оценки количественных параметров чувствительности гибридизационного анализа и стабильности олигонуклеотидных зондов на аффинных микромат-рицах. Проведено исследование влияния структуры, размера наночастиц, условий гибридизационного анализа на аналитические характеристики метода определения нуклеиновых кислот на модельных зондах и генах бета-лактамаз СТХ-М и VIM типов. Проведено исследование зависимости аналитических параметров метода выявления нуклеиновых кислот от количества нуклеиновых кислот и количества бактериальных клеток на примере генов E. coli. Определение минимального количества бактериальных клеток для идентификации клеток E. coli разработанным методом.