Изучение разнообразия вирусов и вирусоподобных генетических элементов хвойных растений: поиск механизмов, обеспечивающих латентный характер инфекции.НИР

Источник финансирования НИР

грант РФФИ

Этапы НИР

# Сроки Название
1 20 апреля 2015 г.-15 декабря 2015 г. Изучение разнообразия вирусов и вирусоподобных генетических элементов хвойных растений: поиск механизмов, обеспечивающих латентный характер инфекции.
Результаты этапа: В ходе проекта российским коллективом в 2015 году будут решаться следующие задачи. 1. Выделение фракции двунитевой РНК из образцов потенциально зараженных хвойных растений и получение кДНК библиотек для дальнейшего секвенирования. Для этого образцы хвойного растения будут гомогенизированы. Затем нуклеиновые кислоты из гомогенизированных образцов будут экстрагированы с помощью буферного раствора, содержащего Трис-HCl, ЭДТА, SDS, бета-меркаптоэтанол и поливинилполипирролидон. Полученная суспензия будет отцентрифугирована, а супернатант отобран и после добавления этанола (до конечной концентрации 20%) перенесен на колонки, содержащие CF-11 целлюлозу. Затем целлюлоза промывается специальными растворами для экстракции ДНК и оцРНК, а после с помощью элюирующего буфера, содержащего NaCl и ЭДТА. Полученная фракция двунитевой РНК будет нормализована и станет матрицей для ПЦР с использованием обратной транскрипции. На основе, полученной таким образом нормализованной кДНК, будут созданы библиотеки, которые будут анализироваться с помощью методов высокопроизводительного секвенирования нового поколения. 2. Изучение проявлений инфекционных свойств модельных вирусов на молодых хвойных культурах. В качестве хвойных культур для исследования проявлений инфекционных свойств модельных вирусами планируется использовать молодые растения ели европейской (Picea abies) и сосны обыкновенной (Pinus sylvestris). Эти растения будут заражены следующими модельными РНК-содержащими вирусами из разных систематических групп, а именно представителями семейства Virgaviridae: вирусом табачной мозаики (ВТМ, род Tobamovirus) , вирусом погремковости табака (ВПТ, род Tobravirus), вирусом штриховатой мозаики ячменя (ВШМЯ, род Hordeivirus) и представителем семейства Alphaflexiviridae Х-вирусом картофеля (ХВК, род Potexvirus). Вышеупомянутые вирусы имеют разное систематическое положение, разную инфекционность и разный спектр хозяев. Идентификация вирусов будет проводиться с помощью методов ПЦР, ПЦР в реальном времени, иммуноферментного анализа и вестерн-блоттинга, причем детектироваться вирусы будут как в образцах из инокулированных частей растения, так и в образцах из первично незараженных участков хвойных. Все это позволит оценить чувствительность хвойных растений к различным РНК-вирусам и охарактеризовать процесс протекания вирусной инфекции для целого ряда растительных вирусов.
2 1 марта 2016 г.-31 декабря 2016 г. Изучение специфических антивирусных механизмов защиты хвойных растений
Результаты этапа:

Прикрепленные к НИР результаты

Для прикрепления результата сначала выберете тип результата (статьи, книги, ...). После чего введите несколько символов в поле поиска прикрепляемого результата, затем выберете один из предложенных и нажмите кнопку "Добавить".