Варианты синтезированного в Escherichia coli рекомбинантного эритропоэтина человека: влияние дополнительных доменов на активность in vitro и in vivoстатья
Статья опубликована в журнале из списка RSCI Web of Science
Статья опубликована в журнале из перечня ВАК
Статья опубликована в журнале из списка Web of Science и/или Scopus
Дата последнего поиска статьи во внешних источниках: 29 мая 2019 г.
Аннотация:Целью работы являлась сравнительная характеристика трех вариантов синтезированного в клетках
Escherichia coli рекомбинантного эритропоэтина человека с дополнительными белковыми доменами: белка
6His-s-tag-EPO, несущего на N-конце s-tag – 15-звенный олигопептид из рибонуклеазы А поджелудочной
железы быка, и белков HBD-EPO и EPO-HBD, содержащих, соответственно, в N- и C-концевых положениях
дополнительный гепарин-связывающий домен (HBD) из костного морфогенетического белка BMP-2 Danio
rerio. В качестве препарата сравнения был использован коммерческий препарат эпостим (ООО «Фарма-
парк», Россия), полученный синтезом в клетках яичников китайского хомячка. Белок EPO-HBD – вариант
синтезированного в E. coli рекомбинантного эритропоэтина c доменом HBD на C-конце, присоединенный
к эритропоэтиновому домену жестким междоменным спейсером, – имеет лучшие характеристики по сравнению с белком HBD-EPO c обратной последовательностью соединения доменов. Белок EPO-HBD обладает повышенной в ~13 раз биологической активностью in vitro, заключающейся в способности вызывать пролиферацию клеток эритролейкемии человека TF-1, большей скоростью ассоциации с рецептором эритропоэтина EPOR, а также лучшими среди четырех исследованных белков параметрами связывания и пролонгированного выхода из носителя – деминерализованного костного матрикса (ДКМ). При подкожном введении EPO-HBD, иммобилизованного на ДКМ, наблюдается существенно более выраженная васкуляризация окружающих тканей, чем при введении ДКМ с другими белками и ДКМ без нанесенного белка. Таким образом, по всем изученным параметрам белок EPO-HBD обладает лучшими характеристиками в сравнении с другими исследованными вариантами EPO, и представляется перспективным изучение возможности его медицинского применения.