НОВЫЙ РЕКОМБИНАНТНЫЙ ПРОДУЦЕНТ ω-АМИДАЗЫ ЧЕЛОВЕКА НА ОСНОВЕ ESCHERICHIA COLIстатья
Статья опубликована в журнале из списка RSCI Web of Science
Статья опубликована в журнале из перечня ВАК
Статья опубликована в журнале из списка Web of Science и/или Scopus
Дата последнего поиска статьи во внешних источниках: 3 июля 2019 г.
Аннотация:Создан искусственный ген ω-амидазы человека (Nit2), адаптированный для высокоэффективной экспрессии в клетках E. coli, получена плазмидная конструкция pQE-Nit2 на его основе, контролируемая промотором фага Т5. Особенностью гена NIT2 в составе конструкции pQE-Nit2 является оптимизированный кодоновый состав, а также наличие искусственно введенной аффинной метки 6His-таг непосредственно после инициаторного кодона ATG (Met), обеспечивающей возможность одностадийной очистки продукта методом металлоаффинной хроматографии на Ni-NTA-агарозе. Оптимизация кодонового состава гена NIT2 проведена таким образом, чтобы вблизи стартовой точки трансляции (первые тридцать кодонов) находилось несколько кодонов, редко встречающихся в природных открытых рамках считывания генома E. coli, а остальные приходились на кодоны с умеренной встречаемостью. На остальном протяжении открытой рамки считывания использовались только кодоны, наиболее часто употребляемые в открытых рамках считывания генома E. coli. С помощью рекомбинантного продуцента получен препарат фермента с активностью 6.2 ± 0.2 мкмоль/мин х мг белка, что соответствует или несколько превышает описанную в литературе удельную активность эталонного фермента из печени крысы. Препарат ω-амидазы человека востребован для тестирования ингибиторов фермента - потенциальных лекарственных средств для коррекции гипераммониемических расстройств при печеночной патологии и лечения онкологических заболеваний.