Фосфатазы Моно- и Дифосфата Тиамина в Синаптосомах Мозга Быкастатья
Статья опубликована в журнале из списка RSCI Web of Science
Статья опубликована в журнале из перечня ВАК
Статья опубликована в журнале из списка Web of Science и/или Scopus
Дата последнего поиска статьи во внешних источниках: 21 октября 2020 г.
Аннотация:Активности фосфатаз моно- и дифосфатов тиамина меняются при нейродегенеративных заболеваниях, однако молекулярная природа этих ферментов у млекопитающих не определена в полной мере. В данной работе фракция синаптосом мозга быка, обогащенная фосфатазными активностями в отношении производных тиамина, была подвергнута аффинной хроматографии на модифицированной тиамином сефарозе (тиамин-сефарозе). В последовательных элюатах белков, связавшихся с носителем, растворами тиамина (рН 7,4 или 5,6), хлорида натрия и мочевины характеризовали фосфатазные активности в отношении тиаминмонофосфата (ТМФ), тиаминдифосфата (ТДФ) и структурно сходных с тиамином пуриновых нуклеотидов. Элюируемые на каждой стадии белки идентифицировали методом масс-спектрометрии, используя базу данных SwissProt по всем организмам, ввиду недостаточной аннотации генома быка. В элюате кислым раствором тиамина идентифицировали пептиды, найденные в двух бактериальных фосфатазах: щелочной фосфатазе L из семейства DING-белков и экзополифосфатазе. Представленность пептидов фосфатазы L во фракциях элюируемых белков коррелировала с элюцией ТМФ-азной активности, а экзополифосфатазы – с элюцией ТДФ-азной активности. Профили элюции данных белков и активностей в отношении фосфатов тиамина отличались от профилей элюции фосфатаз нуклеотидов, свидетельствуя о специфичности ферментов к производным тиамина. Направленный поиск DING-фосфатаз млекопитающих в элюатах с тиамин-сефарозы выявил преимущественную элюцию X-DING-CD4 тиамином (рН 5,6). Для экзополифосфатазы выявлено структурное сходство с обладающими ТДФ-азной активностью апиразами. Полученные результаты свидетельствуют в пользу фосфатазных активностей DING-белков и апираз млекопитающих в отношении ТМФ и ТДФ соответственно.