Влияние последовательности His6 на свойства формиатдегидрогеназы из бактерий Pseudomonas sp 101

Пометун, А.А.; Паршин, П.Д.; Галаничева, Н.П.; Упоров, И.В.; Атрошенко, Д.Л.; Савин, С.С.; Тишков, В.И.

Авторы: Пометун А.А., Паршин П.Д., Галаничева Н.П., Упоров И.В., Атрошенко Д.Л., Савин С.С., Тишков В.И.
Журнал: Вестник Московского университета. Серия 2: Химия
Том: 61
Номер: 4
Год издания: 2020
Издательство: Издательский дом МГУ
Местоположение издательства: Москва
Первая страница: 317
Последняя страница: 325
Аннотация: NAD(P)+-зависимая формиатдегидрогеназа (ФДГ, КФ 1.2.1.2.) активно используется в процессах хирального синтеза с участием оксидоредуктаз для регенерации восстановленного кофактора. Для успешного использования ФДГ в таких системах необходим простой и быстрый способ очистки фермента. В качестве такого способа широко используется металло-хелатная хроматография, для которой необходимо наличие нескольких (шесть и более) остатков гистидина на N- или C-конце аминокислотной последовательности фермента. Зачастую такое добавление остатков гистидина оказывает влияние на свойства ферментов. Нами проведено моделирование структур ФДГ из бактерий Pseudomonas (PseFDH) с различным положением гистидиновой метки и было показано, что наиболее оптимальным является введение последовательности His6 на N-, но не на С-конец фермента. Методом направленного мутагенеза были получены как His6-PseФДГ дикого типа, так и два NADP+-специфичных мутанта. Новые ферменты были выделены в одну стадию практически в гомогенном состоянии. Сравнение их свойств с таковыми для исходных ферментов показало, что введение His-tag не влияет на каталитические свойства и слабо сказывается на термостабильности NADP+-специфичных мутантов.
Добавил в систему: Тишков Владимир Иванович

	ИСТИНА	Войти в систему Регистрация
	ИСТИНА ЦЭМИ РАН
	Главная Поиск Статистика О проекте Помощь

ИСТИНА

ИСТИНА ЦЭМИ РАН

Влияние последовательности His6 на свойства формиатдегидрогеназы из бактерий Pseudomonas sp 101статья

Прикрепленные файлы