Место издания:Центр высоких технологий «ХИМРАР» Химки, Россия
Первая страница:23
Последняя страница:23
Аннотация:Спектроскопия ядерного магнитного резонанса (ЯМР) утвердилась в роли важного ме-тода исследования при поиске лекарственных препаратов. Эксперименты ЯМР предоставляют информацию о структуре и динамических свойствах биомолекул в водной среде, позво-ляют исследовать белок-лигандные взаимодействия. Методы ЯМР применяются для поиска лигандов, прочно связывающихся с белками, а также для изучения факторов, определяющих специфичность взаимодействия лиганда с биологической мишенью.
Дигидрофолатредуктаза (ДГФР) – жизненно важный фермент, встречающийся в большинстве живых организмов. Продукт реакции с участием ДГФР, тетрагидрофолат, является ключевым интермедиатом в биосинтезе пуриновых оснований и некоторых аминокислот. Данная реакция – единственный источник тетрагидрофолата, что обуславливает важную внутриклеточную роль фермента и его выбор в качестве мишени действия лекарственных средств. Антибактериальный препарат триметоприм (ТМП) – один из широко используемых в клинической практике ингибиторов ДГФР. Было показано, что препарат селективно инги-бирует бактериальную форму фермента (с соотношением I50(позвоночные)/I50 (бактерии) по-рядка тысяч). Во многом это обусловлено большим положительным кооперативным эффек-том связывания между ТМП и кофактором НАДФН при образовании тройного комплекса с бактериальной ДГФР.
Методами ЯМР нами была получена информация о трехмерной структуре, динамике и специфических белок-лигандных взаимодействиях для двойных и тройных комплексов бак-териальной (Lactobacillus casei) и человеческой форм фермента с ТМП и НАДФН. Сравнение комплексов, где кооперативный эффект присутствует с теми, где его нет позволило устано-вить два основных фактора, обуславливающие кооперативное взаимодействие лигандов: (i) более сильный гидрофобный контакт лигандов в бактериальном комплексе по сравнению с ДГФР человека; и (ii) более прочная сеть водородных связей в бактериальном комплексе. Второй фактор приводит к общему кооперативному усилению системы водородных связей во всем комплексе белок-лиганд, что подтверждается рядом экспериментов ЯМР. Полученные данные призваны внести вклад в понимание природы молекулярного узнавания.