Аннотация:Тромбоциты – клетки крови, способные к активации и формированию агрегатов, препятствующих кровопотере при по-вреждении сосудов. При активации исходно гомогенная популяция тромбоцитов делится на две субпопуляции, радикально отличающиеся по своим свойствам: одна из них эффективно формирует агрегаты, вторая – прокоагулянтная – ускоряет ре-акции свертывания крови. Механизм разделения тромбоцитов на субпопуляции при активации и их (пато)физиологическая функция остаются неясны. Эксперименты проводились на цельной крови здоровых доноров и мышей. Тромбоциты выделя-лись центрифугированием и гель-фильтрацией, и загружались флуоресцентными красками, чувствительными к концентра-ции кальция в цитоплазме, митохондриях, эндоплазматическом ретикулуме, митохондриальному потенциалу. Для исследо-вания взаимодействия факторов свертывания с тромбоцитами использовалось флуоресцентное мечение. Сигнализация и связывание белков детектировались с помощью проточной цитометрии и конфокальной микроскопии; деградация белков цитоскелета изучалась с помощью электрофореза в полиакриламидном геле. Морфология прокоагулянтных тромбоцитов анализировалась с помощью трансмиссионной и сканирующей электронной микроскопии. Для планирования эксперимента и анализа данных были разработаны системно-биологические компьютерные модели сигнализации в тромбоцитах и мем-бранных реакций на их поверхности. Тромбоциты отвечают на стимуляцию тромбином серией стохастических кальциевых осцилляций, причем повышение уровня стимуляции повышает их частоту. Это ведет к входу кальция в митохондрии через кальциевый унипортер, открытию митохондриальной поры и некротическому механизму гибели в части клеток. У них фор-мируется специфическая морфология: исходное тело клетки служит основой для связывания факторов свертывания и агре-гации, а характерный шарообразный вырост обеспечивает выход прокоагулянтных тромбоцитов на границу тромба при его ретракции. Этому дополнительно способствует разрушение цитоскелета и отделение адгезивных рецепторов от цитоскелета тромбоцитов. В результате поверхность тромба укрепляется фибрином и обладает ослабленными адгезионными свойствами