|
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ИСТИНА ЦЭМИ РАН |
||
ИЗУЧЕНИЕ КАТАЛИТИЧЕСКИХ СВОЙСТВ РЕКОМБИНАНТНОЙ Β-ЛАКТАМАЗЫ КЛАССА А TEM-1 И ЕЕ ИНГИБИРОВАНИЯ СУЛЬБАКТАМОМ, ТАЗОБАКТАМОМ И КЛАВУЛАНОВОЙ КИСЛОТОЙстатья
Статья опубликована в журнале из списка RSCI Web of Science
Статья опубликована в журнале из перечня ВАКСтатья опубликована в журнале из списка Web of Science и/или Scopus
Дата последнего поиска статьи во внешних источниках: 16 февраля 2016 г.
- Авторы: Луговая Анна Михайловна, Григоренко Виталий Георгиевич
- Журнал: Вестник Московского университета. Серия 2: Химия
- Том: 51
- Номер: 3
- Год издания: 2010
- Издательство: Издательский дом МГУ
- Местоположение издательства: Москва
- Первая страница: 174
- Последняя страница: 177
- Аннотация: Изучен гомогенный препарат рекомбинантного фермента β-лактамазы TEM-1 класса А, используемый в различных экспрессионных конструкциях в качестве гена-маркера для обеспечения устойчивости клеток к ампициллину; определены его кинетические параметры с использованием хромогенного субстрата CENTA (KМ = 22 мкМ, V = 0,39 мкМ/с, kкат = 31,2 с-1, kкат/КМ =1,4 мкМ-1 ∙с-1 ). На основании сравнения определенного в работе значения КМ с литературными данными для нативного фермента (КМ = 70 мкМ) показано, что рекомбинантный фермент в 3 раза более специфичен по отношению к субстрату CENTA. Установлен конкурентный тип ингибирования рекомбинантной β-лактамазы для сульбактама, тазобактама, клавулановой кислоты. Впервые определены значения констант ингибирования по субстрату CENTA для сульбактама, тазобактама и клавулановой кислоты (KI(сульбактам) = 0,43 мкМ, KI (тазобактам) = 0,041 мкМ, KI (клавулановая кислота) = 0,046 мкМ). Показано, что наиболее эффективными ингибиторами для рекомбинантной β-лактамазы являются тазобактам и клавулановая кислота, причем их ингибирующее действие можно считать одинаковым.In this work was studied homogeneous preparation of recombinant class A TEM-1 β-lactamase; kinetic parameters obtained with chromogenic substrate CENTA are as follows: KM = 22 μM, V = 0,39 μM/s, kcat = 31,2 s-1, kca/KM =1,4 μM-1s-1. Based on the comparison of determined Michaelis constant (KM = 22 μM) with literature data it is approved that recombinant enzyme is about 3 times more specific against CENTA than the native one (KM = 70 μM). It was ascertained competitive type of inhibition for sulbactam, tazobactam and clavulanic acid. For the first time the inhibition constants for recombinant β-lactamase TEM-1 with CENTA as a substrate for sulbactam, tazobactam, clavulanic acid (KI(sulbactam) = 0,43 μM, KI(tazobactam) = 0,041 μM, KI(clavulanic acid) = 0,046 μM) have been determined. It was shown that tazobactam and clavulanic acid are the most effective inhibitors for the recombinant β-lactamase as having the least value of KI and their inactivation influence can be accepted as identical.
- Добавил в систему: Григоренко Виталий Георгиевич