|
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ИСТИНА ЦЭМИ РАН |
||
ИССЛЕДОВАНИЕ ДИНАМИКИ МИКРОТРУБОЧЕК В ФИБРОБЛАСТАХ КОЖИ ПАЦИЕНТОВ С БОЛЕЗНЬЮ ГЕНТИНГТОНАстатья
- Авторы: Таран А.С., Шувалова Л.Д., Лаврушкина С.В., Богомазова А.Н., Лагарькова М.А., Алиева И.Б.
- Сборник: НАУЧНЫЕ ТРУДЫ ТОМ 1 III объединенного научного форума физиологов, биохимиков и молекулярных биологов / Под ред. Сепиашвили Р.И., Островского М.А
- Том: 1
- Год издания: 2021
- Место издания: Издательство "Перо", 2021. - 165 с Москва
- Первая страница: 81
- Последняя страница: 81
- Аннотация: Болезнь Гентингтона (HD) является следствием мутации в гене белка гентингтина (HTT), участвующего в процессах кле- точного транспорта и эндоцитоза. В эти процессы вовлечены микротрубочки (МТ), являющиеся потенциальной мишенью при развитии данной патологии. Полимеризованные из тубулина, обладающие полярностью, МТ динамичны, они являются «рельсами» для внутриклеточного транспорта, опосредованного моторными белками. Нарушения в динамике МТ сопровож- дают многие нейродегенеративные заболевания, что мотивировало нас на исследование изменения их динамики у пациентов с HD. Поскольку мутантный НТТ экспрессируется во всех клетках больного, в качестве модели мы использовали фибробла- сты, выделенные из биоптатов кожи пациентов с HD и соответствующих им по возрасту доноров. Динамичность МТ регули- руется белками, ассоциированными с их концами. С плюс-концом МТ, на котором происходит преимущественно добавление субъединиц тубулина, ассоциированы многочисленные регуляторные белки, в частности белки семейства EB (end-binding), выполняющие стабилизирующую функцию. Флуоресцентно-меченные плюс-концевые белки МТ являются классическими маркерами, позволяющими визуализировать положение плюс-конца МТ в цитоплазме живой клетки, а по изменению поло- жения анализировать динамику МТ. Однако при исследовании первичной культуры фибробластов используемый для этого стандартный метод трансфекции потребовал модификаций для повышения его эффективности, оптимальной оказалась трансфекция липофектамином 3000. МТ маркировали флуоресцентно-меченным EB-3 и наблюдали за их смещением в ре- жиме реального времени, фиксируя динамику МТ на видео. Динамику МТ анализировали в автоматическом режиме (ис- пользуя собственные скрипты и плагины программы ImageJ) и методом ручного трассирования, который в условиях наших экспериментов давал наименьшую ошибку измерений. Динамику МТ исследовали в различных областях клетки: в централь- ной части (в области ядра и центросомы), на ведущем крае и в хвосте фибробластов. Полученные результаты позволили оценить in vitro различия в динамике МТ фибробластов кожи HD-пациентов и здоровых доноров, что позволяет описать влияние мутантного HTT на динамические свойства МТ. Поддержано РНФ (No 19-15-00425) и Программой Развития МГУ им. М.В. Ломоносова (PNR5.13).
- Добавил в систему: Чуркина Александра Сергеевна