Влияние расположения и ориентации генетического токсин-антитоксинового элемента hok/sok на уровень биосинтеза фармацевтически значимых белков в бактериальной системе экспрессии. Биохимия

Ходак, Ю.А.; Шайфутдинов, Р.Р.; Хасанов, Д.С.; Орлова, Н.А.; Воробьев, И.И.

Авторы: Ходак Ю.А., Шайфутдинов Р.Р., Хасанов Д.С., Орлова Н.А., Воробьев И.И.
Журнал: Биохимия
Том: 88
Номер: 9
Год издания: 2023
Издательство: ФГБУ "Издательство "Наука"
Местоположение издательства: Москва
Первая страница: 1606
Последняя страница: 1619
DOI: 10.31857/S0320972523090129
Аннотация: Генетический токсин-антитоксиновый элемент hok/sok из плазмиды R1 Escherichia coli обеспечи-вает сегрегационную стабильность плазмид. Бактериальные клетки, потерявшие все копии плаз-миды, кодирующей короткоживущий антитоксин, гибнут под действием долгоживущего токсина.Элемент hok/sok в составе векторных плазмид для бактериальной экспрессии может увеличиватьпродуктивное время биосинтеза рекомбинантных белков, замедляя накопление в популяциинепродуцирующих клеток, лишенных целевой плазмиды. В настоящей работе были исследованыразличные варианты расположения и ориентации элемента hok/sok в составе стандартной плаз-миды pET28a с индуцибельным промотором T7lac и геном устойчивости к канамицину. Было об-наружено, что элемент hok/sok сохраняет функциональную активность вне зависимости от распо-ложения на плазмиде и ориентации, бактериальные клетки сохраняли плазмиды с hok/sok после4-х дней культивирования без антибиотика и теряли контрольную плазмиду без данного элемента.На примере трех целевых белков – аспаргиназы E. coli тип II, гормона роста человека и нуклео-протеина вируса SARS-CoV-2 было продемонстрировано, что для цитоплазматических целевыхбелков максимальная продуктивность бактерий сохраняется только при расположении элементаhok/sok на плазмиде выше промотора целевого гена. В случае периплазматической локализациибелка продуктивность бактерий уменьшается для всех вариантов расположения hok/sok при куль-тивировании с антибиотиком, а при периодическом культивировании бактерий без антибиотикапродуктивность лучше сохраняется также при расположении элемента hok/sok выше промоторацелевого гена. Данный вариант векторной плазмиды pEHU позволяет увеличить биосинтез нерас-творимого в цитоплазме бактерий гормона роста человека более, чем в 2 раза при культивирова-нии бактерий без антибиотика, а также поддерживать биосинтез аспарагиназы при периодическомкультивировании без антибиотика в течение 4-х дней на уровне не менее 10 мг/литр. Разработан-ный сегрегационно стабилизированный плазмидный вектор может быть использован для получе-ния в клетках E. coli различных рекомбинантных белков без применения антибиотиков.
Добавил в систему: Воробьев Иван Иванович

	ИСТИНА	Войти в систему Регистрация
	ИСТИНА ЦЭМИ РАН
	Главная Поиск Статистика О проекте Помощь

ИСТИНА

ИСТИНА ЦЭМИ РАН

Прикрепленные файлы