|
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ИСТИНА ЦЭМИ РАН |
||
Нейрональный кальциевый сенсор 1 (NCS1): исследование регуляторной активности в фоторецепторной клеткетезисы доклада
- Авторы: Бакшеева В.E., Назипова А.А., Пермяков С.Е., Сенин И.И., Филиппов П.П., Замятнин А.А., Зерний Е.Ю.
- Сборник: Тезисы докладов на 17-ой Международной Пущинской школе-конференции молодых ученых «БИОЛОГИЯ – НАУКА ХХI ВЕКА»
- Тезисы
- Год издания: 2013
- Место издания: г. Пущино
- Первая страница: 257
- Последняя страница: 258
- Аннотация: Множество процессов, связанных с жизнедеятельностью и функционированием нейронов, регулируется при участии сигналов Са2+. Разнообразие клеточных ответов на эти сигналы обеспечивается за счет действия нейрональных Са2+-сенсоров (НКС) – семейства Са2+-связывающих белков, специфичных для нервной ткани. НКС обладают сходством структурной организации и нередко колокализуются в нейронах одного типа, однако действие каждого из этих белков отличается селективностью в отношении сигнальных партнеров. Примером сигнальной системы, Са2+-зависимая регуляция которой происходит при участии НКС, является передача светового сигнала в фоторецепторных клетках сетчатки глаза. Палочки сетчатки содержат НКС рековерин и белки активаторы гуанилатциклазы, специфичные для фоторецепторных клеток и регулирующие строго определенные мишени в рамках каскада фототрансдукции, а также NCS1 – широко распространенный в нервной ткани белок, функция которого в фоторецепторных клетках остается неизвестной. Целью работы является поиск мишеней NCS1 в фоторецепторной клетке, а также изучение регуляторной активности фоторецепторного NCS1 с учетом его колокализации с другими белками семейства. На основе тотальной РНК из препарата мозга B.taurus получена кДНК, соответствующая ранее охарактеризованному гену NCS1. Впервые обнаружена природная мРНК и получена кДНК, соответствующие мутантной форме NCS1 с заменой K9E (NCS1K9E). Проведено клонирование генов двух обнаруженных форм NCS1 в экспрессионный вектор для E.coli. С помощью коэкспрессии указанных генов с геном N-миристоилтрансферазы 1 S.cerevisiae и последующей хроматографической очистки получены миристоилированные препараты NCS1 и NCS1K9E. Методом аналитической ВЭЖХ показано, что степень миристоилирования рекомбинантных форм NCS1 соответствует природному аналогу. По результатам исследования термостабильности и спектров собственной флуоресценции полученных белков установлено, что мутация K9E не оказывает существенного влияния на структуру NCS1. Показано, что обе формы NCS1 способны взаимодействовать с мембранами фоторецепторной клетки, однако мутация K9E усиливает Ca2+-зависимость этого взаимодействия. На основании структурного анализа высказано предположение, что одной из мишеней NCS1 в фоторецепторной клетке может являться родопсинкиназа – фермент, отвечающий за десенситизацию зрительного рецептора родопсина. Методом аффинного соосаждения показано, что обе формы NCS1 способны взаимодействовать с участком 1-25 родопсинкиназы, отвечающим за присоединение доказанного модулятора фермента – рековерина, причем эффективность такого взаимодействия понижается в ряду рековерин>NCS1>NCS1K9E. Полученные результаты важны для понимания молекулярных механизмов клеточной сигнализации с участием белков НКС. Работа поддержана за счет средств гранта РФФИ № 12-04-01045-а, рук. Зерний Е.Ю.
- Добавил в систему: Бакшеева Виктория Егоровна