Аннотация:Нестин – один из маркеров клеток – потомков нервного гребня, которые сохраняются в тканях взрослого организма в качестве стволовых и участвуют в регенерации тканей. Локализация и функции этих клеток в жировой ткани, а также их роль в регенерации не исследованы.
Целью работы было охарактеризовать нестин-экспрессирующие клетки жировой ткани in vivo и in vitro с точки зрения их стволовости и гормональной регуляции.
В работе были использованы мыши, у которых под нестиновым промотором экспрессируется флуоресцентный зеленый белок GFP. Таким образом, весь пул нестин-экспрессирующих клеток в жировой ткани можно было проследить in vivo и in vitro.
На тотальных препаратах и толстых срезах жировой ткани мыши окрашенных антителами против CD31 (маркер эндотелия), NG2, aSMA и PDGFRb обнаружены группы, цепочки и единичные нестин-экспрессирующие клетки локализованные как периэндотелиально, так и в строме между зрелыми адипоцитами.
В тотальной популяции МСК (мезенхимных стволовых/стромальных клеток) выделенных из жировой ткани по стандартному протоколу доля нестин-экспрессирующих клеток составляет 5-10 % и незначительно сокращается ко 2-3 пассажу. В составе гетерогенной популяции МСК нестин-экспрессирующие клетки способны пролиферировать и мигрировать «в экспериментальную рану». Отсортированные нестин-экспрессирующие клетки способны давать клоны и дифференцироваться в адипогенном, остео- и хондрогенном направлениях. Иммуноцитохимический анализ выявил экспрессию маркеров, характерных для мышиных мезенхимных стромальных и стволовых клеток. Таким образом, нестин-экспрессирующие клетки обладают характеристиками стволовых.
Ранее мы показали способность отдельных клеток в составе гетерогенной популяции МСК отвечать на гормоны (Kotova et al., 2014) и обнаружили транзиторное увеличение чувствительности отдельных клеток в ответ на действие катехоламинов (Tyurin-Kuzmin et al., 2016). Была высказана гипотеза, что именно стволовые клетки в составе гетерогенной популяции МСК обладают способностью усиления чувствительности в ответ на действие гормона, однако анализ ответа нестин-экспрессирующих клеток на катехоламины не выявил в них повышения внутриклеточного Са2+. Можно предположить, что исследуемая популяция нестин-позитивных клеток задействует другой механизм внутриклеточной передачи сигнала в ответ на действие гормонов.
Исследование поддержано Российским Научным Фондом грант №14-15-00439