ИСТИНА

Цель работы: исследование бета-лактамаз и поиск новых ингибиторов для преодоления резистентности микроорганизмов к бета-лактамным антибиотикам Методы работы: анализ информационных литературных источников, биоинформационный анализ, получение рекомбинантных бета-лактамаз методами генной инженерии, изучение каталитической активности и стабильности методами ферментативной кинетики, моделирование структуры, докинг, химический синтез. Результаты работы: Созданы системы экспрессии генов бета-лактамаз ТЕМ, СТХ-М, NDM типов, обеспечивающие синтез рекомбинантных белков в растворимой активной форме. Созданы новые штаммы E.coli - продуценты бета-лактамаз молекулярных классов А и В. Проведено физико-химическое изучение свойств полученных рекомбинантных бета-лактамаз. Исследована термоинактивация полученных рекомбинантных мутантных форм бета-лактамазы ТЕМ типа при повышенной температуре. Впервые показано, что участок поверхности белковой глобулы бета-лактамаз ТЕМ типа, включающий остаток 39, может рассматриваться как потенциальная «горячая точка» для воздействия на фермент. Предложена структура и синтезирован новый хромогенный субстрат бета-лактамаз CMPD1 на основе цефалоспорина с эпоксидной функциональной группой. Синтезированы два новых ингибитора бета-лактамаз не бета-лактамной структуры на основе ацилированного феноксианилина и тиомочевины. Проведенное исследование структуры комплекса бета- лактамазы ТЕМ типа с новым ингибитором на основе ацилированного феноксианилина позволило выявить еще одну «горячую точку» поверхности бета-лактамазы, расположенную на входе в активный центр. Предложен новый ингибитор метало-бета-лактамаз молекулярного класса В (АМ 2015-1). Показано ингибирующее действие на штаммы-продуценты карбапенемаз NDM-1, VIM-2 и «сериновой» карбапенемазы OXA-48. Для кристаллов бета-лактамазы ТЕМ-171 впервые была определена атомная структура с разрешением 2.0 Å. Впервые была определена атомная структура комплексов бета-лактамазы TEM-171 с тазобактамом. Расшифровка данных ренгеноструктурного анализа комплексов, полученных в двух разных экспериментальных условиях, показала существование двух форм комплексов. Степень внедрения: создан научный задел по анализу белковых глобул бета-лактамаз и поиску «горячих точек» на поверхности для направленного действия на фермент, поиску новых ингибиторов бета-лактамаз для преодоления резистентности бактерий к антибиотикам