ИСТИНА

Работы на данном этапе выполнялись в рамках двух основных проектов: 1. Генетические основы заболеваний; 2. Новые лиганды для направленного транспорта. В рамках проекта 1 «Генетические основы заболеваний» были получены достоверные доказательства кодирующей способности теломеразной РНК человека. С целью выяснения функциональной роли белка hTERP, кодируемого теломеразной РНК человека, созданы клеточные линии с суперэкспрессией теломеразной РНК дикого типа и ее мутантных форм (с нарушениями открытой рамки считывания), а также линии с мутациями, инактивирующими открытую рамку считывания. Сделано предположение, что белок hTERP, играет важную роль в индукции аутофагии, обеспечивая защитные функции в условиях индукции апоптоза. Методом РНК-интерференции показано, что в регуляции транскрипции и процессинге теломеразной РНК человека участвует интегратор. В рамках задачи поиска среди РНК, относимых к длинным некодирующим, потенциально кодирующих небольшие пептиды, и изучения их функции, выявили LINC00116 (1500011K16Rik у мыши), транскрибирующуюся с хромосомы 2 и содержащую высококонсервативную область. В результате анализа секвенирования транскриптома было найдено несколько специфических групп генов, экспрессия которых изменяется при инактивации 1500011K16Rik. С использованием плазмиды, несущей ген 1500011K16Rik с аффинным довеском из HA-эпитопов на N-конце с помощью направленного разрезания генома клеточной линии фибробластов мыши NIH 3T3, было проведено встраивание в геном участка, кодирующего НА-эпитоп. Подтверждена цитоплазматическая локализация продукта гена 1500011K16Rik и показано, что данный продукт находится в митохондрии. Обнаружен белок партнер 1500011K16Rik, цитохром b5 редуктаза 3 (CYB5R3). С целью изучения гипотетических РНК метилтрансфераз исследованы гены WBSCR27 и KIAA1456, являющиеся отдаленными гомологами генов РНК метилтрансфераз дрожжей. Созданы стабильные клеточные линии с повышенной экспрессией гибридных белков WBSCR27-НА и KIAA1456-НА. Для метилтрансферазы WBSCR27 проведена пробная иммунопреципитация с использованием анти-HA антител, иммобилизованных на агарозе. В результате показано, что белок WBSCR27-НА выделяется в количествах, достаточных для его масс-спектрометрической идентификации. Получены первичные нокаутные мыши для создания линий нокаутных мышей, гомозиготных по инактивированным аллелям генов WBSCR27 и KIAA1456.