ИСТИНА

Содержание в плазме крови человека ангиотензин-превращающего фермента (АПФ), продуцированного кардиомиоцитами в тканях сердца, может указывать на развитие патологий сердечно-сосудистой системы и позволит оценить риски развития кардиальных осложнений. Вследствие этого задача создания метода быстрой регистрации АПФ является актуальной. Для этого может быть использована спектроскопия гигантского комбинационного рассеяния (ГКР), которая ранее показала себя перспективной в решении задач количественного и качественного определения биологических аналитов различной природы, в том числе белков, ферментов, вирусов и др. Для проведения исследований были выделены и очищены до электрофоретически гомогенного состояния АПФ из разных тканей и жидкостей организма человека (сердца, легких и семенной жидкости). Источник АПФ определяет индивидуальный характер гликозилирования молекулы, что должно отражаться в колебательном спектре ферментов. В результате измерений впервые были получены ГКР спектры АПФ из разных источников на планарных наноструктурированных тонких пленках серебра, ранее показавших себя эффективными для получения ГКР спектров высокомолекулярных аналитов. Измерения были проведены с помощью спектрометра комбинационного рассеяния на основе конфокального микроскопа на длине волны возбуждения 785 нм. Для анализа полученного массива высокой размерности спектров трех видов АПФ была использована модель линейного дискриминантного анализа. С помощью нее удалось получить представление спектра в пространстве более низкой размерности по сравнению с исходной. Показано, что спектры различных гликоформ АПФ в нем эффективно разделимы, что говорит о перспективности использования ГКР спектроскопии для дальнейших исследований по определению сердечного АПФ на фоне плазмы крови и АПФ из других источников. Далее с помощью свойства линейности классификатора была проведена оценка вкладов спектральных признаков в разделение различных видов АПФ и определены интервалы с их максимальными значениями. Выделенные интервалы соответствовали шести полосам колебаний: 833 (Tyr), 1605, 1241 (CH2 wag.), 1169, (NH3+ def. в Leu(Trp-Leu)), 1473 (Cγ, Cδ def. в Lys) см-1. Несоотнесенные полосы колебаний могут принадлежать непосредственно к гликановой составляющей ферментов.