ИСТИНА

Оранжевый каротиноидный белок (ОКБ, Оrange Сarotenoid Рrotein - OCP) - фотоактивный белок, защищающий фотосинтетический аппарат цианобактерий от избытка солнечного света с помощью механизма нефотохимического тушения. Для осуществления тушения белок OCP под действием синего света переходит из оранжевой стабильной формы (OCPO) в сигнальную красную (OCPR). В данной работе мы использовали OCP, меченный тетраметилродамин-малеимидом (TMR). Данный комплекс OCP-TMR обладает фотоактивностью, при этом значения флуоресценции крайне чувствительны к изменениям состояния белка, а именно конформации и расстоянию между молекулой каротиноида и TMR в фотоцикле. Используя метод FRET (миграция энергии по индуктивно-резонансному механизму Ферстера), мы определили, что расстояние между TMR связанного цистеином в C-домене и каротиноидом увеличивается на 18 Å при фотоконверсии, при этом происходит смещение молекулы 3-гидроксиэхиненона (hECN) в N-домен. С помощью метода анизоторопии флуоресцении, мы увидели, снижение скорости вращения OCPR. Вероятно, это указывает на то, что после фотоактивации происходит увеличение гидродинамического радиуса OCP. Таким образом, полученные нами результаты поддерживают идею о значительных структурных изменениях OCP. Полученный OCP-TMR гибридный комплекс оказался чувствителен к интенсивности света, температуры и вязкости растворителя. Следовательно, данные свойства позволяют использовать комплекс OCP-TMR для разработки новых биосенсоров.